| Zebrafish Embryo Xenograft and Metastasis Assay
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Author:
Date:
2018-09-20
[Abstract] Xenograft models, and in particular the mouse xenograft model, where human cancer cells are transplanted into immunocompromised mice, have been used extensively in cancer studies. Although these models have contributed enormously to our understanding of cancer biology, the zebrafish xenograft model offers several advantages over the mouse model. Zebrafish embryos can be easily cultured in large quantities, are small and easy to handle, making it possible to use a high number of embryos for each experimental condition. Young embryos lack an efficient immune system. Therefore the injected ...
[摘要] 异种移植模型，特别是小鼠异种移植模型，其中人癌细胞被移植到免疫受损小鼠中，已广泛用于癌症研究。尽管这些模型对我们对癌症生物学的理解做出了巨大贡献，但斑马鱼异种移植模型与鼠标模型相比具有多种优势。斑马鱼胚胎可以很容易地大量培养，体积小且易于处理，因此可以在每种实验条件下使用大量胚胎。年轻的胚胎缺乏有效的免疫系统。因此，注射的癌细胞不被排斥，并且原发性肿瘤和微转移的形成是快速的。胚胎的透明度使得能够在完整和活的胚胎中对原发性肿瘤和转移瘤进行成像。在这里，我们描述了一种方法，其中表达GFP的肿瘤细胞被注射到斑马鱼胚胎的心包空间。在注射后4天，对胚胎成像并分析原发性肿瘤和远端微转移的形成。
【背景】 斑马鱼（ Danio rerio ）是一种小型淡水鱼，不仅在发育生物学中，而且在生物医学中越来越受欢迎。快速发展的领域之一是使用斑马鱼作为癌症生物学研究的模型。斑马鱼高效可靠地交配，可以产生大量小，透明，外部发育的后代，可以在例如，多孔板中轻松培养（White et al。 >，2013）。有趣的是，人类肿瘤细胞可以植入斑马鱼胚胎中，许多异种移植物能够通过在胚胎中生长，侵入和转移来忠实地重演它们的恶性行为（Lee et al。，2005; Nicoli et al。，2007; Chapman et ...
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| Microvesicle Isolation from Rat Brain Extract Treated Human Mesenchymal Stem Cells
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Microvesicle (MVs) are submicron-sized membranous vesicles that are either actively released from cells via secretory compartments or shed from cell surface membranes. MVs are generated by many cell types and serve as vehicles that transfer biological information (e.g., protein, mRNA, and miRNA) to distant cells, thereby affecting their gene expression, proliferation, differentiation, and function. Although their physiological functions are not clearly defined, recent studies have shown their therapeutic potential for tissue repair and regeneration. While MVs can be isolated readily ...
[摘要] 微囊泡（MV）是亚微米尺寸的膜泡囊，其通过分泌室从细胞中积极释放或从细胞表面膜脱落。 MV由许多细胞类型产生并且用作将生物信息（例如，蛋白质，mRNA和miRNA）转移到远端细胞的载体，从而影响其基因表达，增殖，分化和功能。 虽然他们的生理功能没有明确定义，但最近的研究已经显示出其组织修复和再生的治疗潜力。 虽然MV可以从间充质干细胞（MSC）和来自各种来源的其他细胞类型容易地分离，但在体外常规培养条件下MV的产量是限制因素之一， 功能研究以及体外分析分析。 在这里，我们提供了一个通过大鼠脑提取物预处理MSC增加微泡产量的方案。
【背景】通过直接重编程或利用间充质干细胞进行细胞替代治疗来产生神经干细胞或神经细胞是神经变性疾病的潜在选择（Adib等人，2015）。最近的研究已经证明，来自MSC的微泡代表了增强组织再生，例如神经元再生，免疫调节，脑损伤中的血管发生的其他细胞替代方法的新颖且安全的替代方案（Kim等人，2013） ; Porro等，，2015; Lee等人，2016）。对受损组织外源信号如何影响微泡数量和组成的了解甚少。 MSCs的功能分泌物的含量和数量可以根据微环境的显着变化（Qu等人，2007）。例如，已知缺血性脑提取物或缺氧诱导合成有益于组织再生过程的许多细胞因子和生长因子（Chen等，2007; Shin et ...
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| Isolation and Cultivation of Primary Brain Endothelial Cells from Adult Mice
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Brain endothelial cells are the major building block of the blood-brain barrier. To study the role of brain endothelial cells in vitro, the isolation of primary cells is of critical value. Here, we describe a protocol in which vessel fragments are isolated from adult mice. After density centrifugation and mild digestion of the fragments, outgrowing endothelial cells are selected by puromycin treatment and grown to confluence within one week.
[摘要] 脑内皮细胞是血脑屏障的主要组成部分。 为了研究脑内皮细胞在体外的作用，原代细胞的分离是临床价值。 在这里，我们描述了一种方案，其中血管片段与成年小鼠分离。 在密度离心和片段的温和消化后，通过嘌呤霉素处理选择出生长的内皮细胞，并在一周内生长至汇合。
【背景】血脑屏障保护大脑免受细胞和物质的不受控制的侵入。 这主要是由脑内皮细胞形成的屏障组成的紧密和粘附连接限制细胞旁运输。
该方案被开发以克服维持其关键特征的小鼠脑内皮细胞系的有限可用性，例如表达足够量的紧密连接蛋白如闭合蛋白，ZO-1或紧密连接蛋白-5以诱导高跨内皮细胞抗性。
此外，从内含基因修饰的小鼠中分离脑内皮细胞可以在体外研究基因特异性功能。
使用这种方法，我们以前补充了体内研究，证明NF-κB信号在脑内皮细胞中维持正常血脑屏障功能的重要性（Ridder等，2015）。
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