| Detection of ASC Oligomerization by Western Blotting
|
|
Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] The apoptosis-associated speck-like protein with a caspase-recruitment domain (ASC) adaptor protein bridges inflammasome sensors and caspase-1. Upon inflammasome activation, ASC nucleates in a prion-like manner into a large and single platform responsible for the recruitment and the activation of caspase-1. Active caspase-1 will in turn promote the proteolytic maturation of the pro-inflammatory cytokine IL-1β. ASC oligomerization is direct evidence for inflammasome activation and its detection allows a read-out independent of caspase-1 and IL-1β. This protocol describes how to detect the ...
[摘要] 具有半胱天冬酶募集区（ASC）衔接蛋白的凋亡相关斑点样蛋白桥联炎症体传感器和半胱天冬酶-1。在炎性体活化后，ASC以类似朊病毒的方式成核，成为负责募集和激活半胱天冬酶-1的大而单一的平台。活性胱天蛋白酶-1将反过来促进促炎细胞因子IL-1β的蛋白水解成熟。 ASC寡聚化是炎性体激活的直接证据，其检测允许读取与caspase-1和IL-1β无关。该方案描述了如何通过蛋白质印迹检测ASC的寡聚化。
背景 Inflammasomes是大量的多蛋白平台，其感测各种微生物，内源和环境胁迫因子，导致促炎IL-1细胞因子家族的成熟（Martinon等人，2002; Sharma和Kanneganti， 2016）。激活后，炎性细胞传感器通过pyrin结构域（PYD）-PYD同型相互作用募集衔接蛋白ASC。 ASC通过胱天蛋白酶激活和募集域（CARD）-CARD相互作用又结合半胱天冬酶-1，并有利于caspase-1的自我蛋白水解切割，导致IL-1β和IL-18的成熟（Hoss等人。，2016）。 Inflammasome激活引发ASC二聚体的超分子寡聚化成称为“ASC-specks”或“pyroptosome”（Fernandes-Alnemri等人，2007）的大交织原纤维。 ASC-speck / ...
|
|
|
| Activity-based Pull-down of Proteolytic Standard and Immunoproteasome Subunits
|
|
Author:
Date:
2016-12-20
[Abstract] Activity-based probes (ABP) are small organic molecules that irreversibly bind to the active center of a specific enzyme family and may be coupled to a fluorophore or an affinity tag (Li et al., 2013). Here, we describe a method to pull-down active catalytic standard and immunoproteasome subunits in cell lysates using the biotinylated, proteasome-specific ABP Biotin-Epoxomicin (Bio-EP). Covalent labeling of the active catalytic subunits with Bio-EP is followed by a pull-down using streptavidin-coated beads. After elution from the beads, enriched subunits may be detected via Western ...
[摘要] 基于活性的探针（ABP）是不可逆地结合特定酶家族的活性中心并且可以偶联至荧光团或亲和标签的小有机分子（Li等人，2013）。在这里，我们描述了使用生物素化的蛋白酶体特异性ABP生物素 - 环氧丙素（Bio-EP）在细胞裂解物中下拉活性催化标准和免疫蛋白酶体亚基的方法。用Bio-EP共价标记活性催化亚单位，然后使用链霉抗生物素蛋白包被的珠子进行下拉。从珠中洗脱后，可以通过Western印迹，串联质谱法（Li et al。，2013）或其他技术检测富集的亚单位。
背景 蛋白酶体是存在于真核细胞的细胞核和细胞质中的桶形多分子酶复合物。蛋白质降解是重要的，包括加工MHC I呈递的抗原肽，并调节许多细胞过程（Kammerl和Meiners，2016）。在造血起源的细胞中，标准（组成型）蛋白酶体通常被免疫蛋白酶体（Meiners等人，2014）所替代，其在三种不同的催化活性β-亚基的掺入中不同（图1）。
为了研究单个催化亚基的分子功能并调节生理过程，亚基特异性蛋白酶体抑制剂的发展是必不可少的。 de ...
|
|
|
| Establishment of Patient-Derived Xenografts in Mice
|
|
Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] Patient-derived xenograft (PDX) models for cancer research have recently attracted considerable attention in both the academy and industry (Hidalgo et al., 2014; Wilding and Bodmer, 2014). PDX models have been developed from different tumor types including lung cancer to improve the drug development process. These models are used for pre-clinical drug evaluation and can be used for the predictive results of clinical outcomes because they conserve original tumor characteristics such as heterogeneity, complexity and molecular diversity (Kopetz et al., 2012). Additionally, PDX ...
[摘要] 用于癌症研究的患者衍生的异种移植（PDX）模型最近在学术和工业中引起了相当大的关注（Hidalgo等人，2014; Wilding和Bodmer，2014）。 PDX模型已经从不同的肿瘤类型开发，包括肺癌，以改善药物开发过程。 这些模型用于临床前药物评价，并且可用于临床结果的预测结果，因为它们保留原始肿瘤特征，例如异质性，复杂性和分子多样性（Kopetz等人，2012） 。 此外，PDX模型为个性化药物治疗提供了潜在的工具。 在该协议中，我们提出了使用来自小细胞肺癌（SCLC）患者的原发性肿瘤组织在小鼠中建立PDX的方法。
|
|
|