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HeraeusTM BiofugeTM StratosTM Centrifuge Series

Heraeus TM Biofuge TM Stratos TM离心机系列

公司名称: Thermo Fisher Scientific
产品编号: 75005282
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Chromatin Affinity Purification (ChAP) from Arabidopsis thaliana Rosette Leaves Using in vivo Biotinylation System
Author:
Date:
2018-01-05
[Abstract]  Chromatin Affinity Purification (ChAP) is widely used to study chromatin architecture and protein complexes interacting with DNA. Here we present an efficient method for ChAP from Arabidopsis thaliana rosette leaves, in which in vivo biotinylation system is used. The chromatin is digested by Micrococcal Nuclease (MNase), hence the distribution of nucleosomes is also achieved. The in vivo biotinylation system was initially developed for Drosophila melanogaster (Mito et al., 2005), but the presented protocol has been developed specifically for Arabidopsis ... [摘要]  染色质亲和纯化(ChAP)被广泛用于研究染色质结构和与DNA相互作用的蛋白质复合物。 在这里,我们提出了一种有效的从拟南芥莲座叶中ChAP的方法,其中使用了体内生物素化系统。 染色质被Micrococcal核酸酶(MNase)消化,因此核小体的分布也被实现。 体内生物素化系统最初是为黑腹果蝇而开发的(Mito et al。2005),但是所提出的方案是专门为 拟南芥(Sura et。,2017)。

【背景】染色质免疫沉淀(ChIP)成为研究染色质结构和组织的最重要和最常用的技术之一。但是,它需要高质量的抗体,不会与非特异性靶标发生交叉反应。在含有细胞壁并富含光合作用相关化合物和蛋白质的植物中,这是相当难以实现的,这些化合物和蛋白质经常引起交叉反应性问题。另一方面,获得稳定的转基因生物是植物常规和容易的策略。由于这些原因,大多数植物研究人员选择基因标签,获得融合蛋白,并用ChIP替代方法即染色质亲和纯化(ChAP)来研究染色质。 ChAP技术已被证明在植物染色质研究中非常有效(Zentner和Henikoff,2014)。此外,它通常比经典ChIP便宜,因为它不需要产生抗体,并且通常比ChIP更有效,因为标签以比直接针对感兴趣的蛋白质产生的抗体更高的亲和力被识别。 ...

The Application of Quercetin to Study the Effect of Hsp70 Silencing on Plant Virus Infection in Nicotiana benthamiana Plants
Author:
Date:
2015-12-05
[Abstract]  Pepino mosaic virus (PepMV) is a mechanically-transmitted pathogen affecting tomato plants worldwide. Like with other plant viruses (Verchot, 2012), the heat shock cognate protein 70 homolog (Hsc70) was identified as an interactor of the PepMV coat protein (CP) (Mathioudakis et al., 2012). Here, we describe a pharmacological approach to silence Hsp70 in plants using quercetin (Mathioudakis et al., 2014), an Hsp70 protein expression flavonoid inhibitor (Hosokawa et al., 1990; Manwell and Heikkila 2007). In the case of Hsp70, this methodology ... [摘要]  Pepino花叶病毒( PepMV )是一种机械传播的病原体,影响全世界的番茄植株。与其他植物病毒一样(Verchot,2012),热休克同源蛋白70同源物(Hsc70)被鉴定为PepMV外壳蛋白(CP)的相互作用物(Mathioudakis等人,2012)。在这里,我们描述了使用槲皮素使沉默Hsp70在植物中的药理学方法(Mathioudakis等人,2014),Hsp70蛋白质表达类黄酮抑制剂(Hosokawa等人,1990 ; Manwell和Heikkila 2007)。在Hsp70的情况下,该方法表示比通过反向遗传学测定(例如VIGS方法)沉默Hsp70更快和更容易的方法。使用注射器用槲皮素(溶解于DMSO中)或DMSO(对照植物)浸润2至3周龄的烟草烟草的完全膨胀的叶子。用PepMV病毒接种物机械接种植物。在接种后4天通过免疫印迹分析在局部叶子上分析Hsp70和PepMV的积累。

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