| α-Synuclein Aggregation Monitored by Thioflavin T Fluorescence Assay
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Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract] Studying the aggregation of amyloid proteins like α-synuclein in vitro is a convenient and popular tool to gain kinetic insights into aggregation as well as to study factors (e.g., aggregation inhibitors) that influence it. These aggregation assays typically make use of the fluorescence dye Thioflavin T as a sensitive fluorescence reporter of amyloid fibril formation and are conducted in a plate-reader-based format, permitting the simultaneous screening of multiple samples and conditions. However, aggregation assays are generally prone to poor reproducibility due to the ...
[摘要] 研究淀粉样蛋白如α-突触核蛋白体外聚集是一种方便和流行的工具，可以获得聚集的动力学见解以及研究因子（例如，聚集抑制剂） 影响它。 这些聚集测定通常利用荧光染料硫磺素T作为淀粉样蛋白原纤维形成的敏感荧光报告物，并且以基于读板器的形式进行，允许同时筛选多个样品和条件。 然而，由于原纤维成核的随机性质和调节因子的多样性，聚集测定通常倾向于较差的再现性。 在这里，我们提出了一个简单和可重复的协议，以研究基于读板器的测定中α-突触核蛋白的聚集。
【背景】内源性蛋白质与淀粉样原纤维的聚集是一种致病过程，与几种疾病相关，例如，神经退行性疾病如阿尔茨海默病（AD）或帕金森病（PD）以及全身性疾病如AL淀粉样变性（ Knowles et al。，2014）。通过基于硫磺素T荧光的聚集测定，可以在基于板读者的装置中在体外中概括该过程，从而允许根据各种影响因素研究淀粉样蛋白的聚集动力学。
硫磺素T（ThT）是一种荧光染料，最初用于组织学样本中的淀粉样蛋白原纤维染色，于1959年由Vassar和Culling（Vassar和Culling，1959），其在体外检测和定量淀粉样纤维的应用
目前，硫代黄素T的聚集测定主要在荧光板读数器中进行，其中例如，96条件可以同时测试。由于原纤维成核的随机性质和影响蛋白质聚集的多种因素，这些测定法具有较差的重现性。因此，已经采用了增加ThT测定的再现性的策略，例如在测量期间使用井板的轨道摇动以及向孔中添加玻璃珠以改善混合（Giehm和Otzen，2010）。 ...
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| Saccharification Protocol for Small-scale Lignocellulosic Biomass Samples to Test Processing of Cellulose into Glucose
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Author:
Date:
2016-01-05
[Abstract] Second generation biofuels are derived from inedible lignocellulosic biomass of food and non-food crops. Lignocellulosic biomass is mainly composed of cell walls that contain a large proportion of cellulosic and hemicellulosic polysaccharides. An interesting route to generate biofuels and bio-based materials is via enzymatic hydrolysis of cell wall polysaccharides into fermentable sugars, a process called saccharification. The released sugars can then be fermented to fuels, e.g., by use of yeast.
To test the saccharification efficiency of lignocellulosic biomass on a ...
[摘要] 第二代生物燃料衍生自食物和非食物作物的不可食用的木质纤维素生物质。木质纤维素生物质主要由含有大比例的纤维素和半纤维素多糖的细胞壁组成。生成生物燃料和生物基材料的有趣途径是通过将细胞壁多糖酶水解成可发酵的糖，这一过程称为糖化。释放的糖然后可以例如通过使用酵母发酵成燃料。
为了在实验室规模上测试木质纤维素生物质的糖化效率，建立了仅使用少量生物质和低浓度酶的手动糖化方案。该方案可以用于不同的植物物种，例如拟南芥（Arabidopsis thaliana），烟草，玉米和杨树。低的酶浓度使得可以检测糖化产量的微妙改进并分析水解的速度。虽然包括特定的酸和碱预处理，但是糖化步骤可以在任何其它预处理之后。由于不需要先进的设备，该方案可以在许多实验室进行以分析糖化产量。该方案最初在Van Acker等人（2013）中描述。
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