| Differential Fractionation of Erythrocytes Infected by Plasmodium berghei
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Author:
Date:
2020-06-05
[Abstract] The study of host/pathogen interactions at the cellular level during Plasmodium intra-erythrocytic cycle requires differential extraction techniques aiming to analyze the different compartments of the infected cell. Various protocols have been proposed in the literature to study specific compartments and/or membranes in the infected erythrocyte. The task remains delicate despite the use of enzymes or detergents theoretically capable of degrading specific membranes inside the infected cell.
The remit of this protocol is to propose a method to isolate the erythrocyte cytosol ...
[摘要] [摘要 ] 疟原虫内红细胞周期中细胞水平上宿主/病原体相互作用的研究需要采用差异提取技术来分析感染细胞的不同区室，文献中提出了各种方案来研究特定的区室和/或尽管理论上使用酶或去污剂能够降解被感染细胞内部的特定膜，但这项工作仍然很棘手。
该方案的任务是提出一种通过percoll 梯度从感染细胞的其他区室中分离出红细胞胞浆和鬼影的方法，此外，使用equinatoxin II 裂解红细胞膜的方法已经被证明是更有效的方法。有效的在红细胞裂解不管细胞感染状态，相比常用链球菌溶血素。该虫空泡（PV）的含量收集皂素后，恢复细胞膜和寄生虫胞液蛋白通过的Triton X-100裂解，裂解液由此获得的前通过分析W¯¯ 西部时代印迹以评估各种提取steps.This协议的准确度允许主机室的从寄生虫隔间（PV和寄生虫）的分离，从而导致出口到主机宿主蛋白质的潜力的研究，以及寄生虫蛋白质细胞。
[背景] 本文所介绍的协议是，我们最初发表在一个协议的一个改进的科学报告.The 该协议的最初的目标是执行的表征P. 疟原虫由寄生虫出口到它的主机cell.This蛋白允许的免疫荧光测定法的证实，证实了蛋白质的输出-以及被布雷菲德菌素A 阻断-以及在被感染的红细胞中输出时相互作用蛋白的分析（Gnangnon et al。，2019）。
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| Cell-free Reconstitution of the Packaging of Cargo Proteins into Vesicles at the trans Golgi Network
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Author:
Date:
2020-03-05
[Abstract] Protein sorting at the trans Golgi network (TGN) plays important roles in targeting newly synthesized proteins to their specific destinations. The aim of this proposal is to reconstitute the packaging of non-Golgi resident cargo proteins into vesicles at the TGN, utilizing rat liver cytosol, semi-intact mammalian cells and nucleotides. The protocol describes how to perform the vesicle formation assay, how to isolate vesicles and how to detect cargo proteins in vesicles. This reconstitution assay can be used to quantitatively measure the efficiency of the packaging of a specific cargo ...
[摘要] [摘要] 反式高尔基体网络（TGN）上的蛋白质分选在将新合成的蛋白质靶向其特定目的地方面起着重要作用。该提议的目的是利用大鼠肝细胞溶质，半完整的哺乳动物细胞和核苷酸，在TGN处将非高尔基驻留的货物蛋白重新包装成囊泡。该协议描述了如何进行囊泡形成测定，如何分离囊泡以及如何检测囊泡中的货物蛋白。该重构测定法可用于定量测量在特定实验条件下将特定货物蛋白包装到TGN的运输小泡中的效率。
[背景] 的反式高尔基体网络（TGN）是在分泌运送路径的必要的交通枢纽。为了确保水泡运输的保真度，真核细胞利用各种蛋白质分选设备将特定的货物蛋白质准确地包装到TGN的运输小泡中，然后运至特定的目的地（Guo 等人，2014）。为了加深我们对TGN分选过程特异性的理解，重要的是开发一种能够忠实地重构TGN囊泡形成和货物分选过程的分析方法。该测定法可用于直接和定量地测量特定因子在调节特定货物蛋白包装到运输小泡中的作用。从内质网（ER）将货物蛋白包装到COPII囊泡中的无细胞重构已得到很好的建立（Kim 等，2005; Kim 等，2007; Merte 等，2010; Yuan 等。，2018；Niu 等，2019；）。已经开发出一种体外测定法，其在TGN处重构特定货物蛋白TGN46在运输小泡中的释放（Ponnambalam 等，1996；Wakana ...
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| Detection of Apoptosis-like Cell Death in Ustilago maydis by Annexin V-FITC Staining
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Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Programmed cell death (PCD) guides the transition between key developmental stages in many organisms. PCD also remains an important fate for many organisms upon exposure to different stress conditions. Therefore, an insight into the progression of PCD during the execution of a biological phenomenon can yield significant details of the underlying mechanism. Apoptosis, as well as apoptosis-like programmed cell death, constitutes one of the forms of PCD in higher and lower eukaryotes respectively. Flipping of phosphatidylserine (PS) from the inner leaflet of the plasma membrane to the outer ...
[摘要] 程序性细胞死亡（PCD）指导许多生物体的关键发育阶段之间的过渡。 PCD在暴露于不同的胁迫条件下仍然是许多生物的重要命运。因此，在执行生物现象期间洞察PCD的进展可以产生潜在机制的重要细节。细胞凋亡以及凋亡样程序性细胞死亡分别构成高等和低等真核生物中PCD的一种形式。将磷脂酰丝氨酸（PS）从质膜的内部小叶翻转到外部小叶是凋亡/凋亡样PCD的不同标志之一，其标志着所述细胞死亡事件的开始。可以使用与PS特异性结合的膜联蛋白V-FITC通过染色靶细胞来检测这种翻转。在 Ustilago maydis 中，由于细胞壁的存在，膜联蛋白V-FITC对外露PS的染色是困难的。因此，这种染色的关键在于，在不显着改变下面的质膜结构/拓扑结构的情况下，温和地去除细胞壁。该协议强调了PS染色对 Ustilago maydis 中应激细胞原生质体的依赖性。
【背景】PS外化是早期可以检测到的凋亡样PCD的标志之一（Martin et al。，1995）。因此，质膜在细胞外膜上的出现标志着凋亡细胞死亡现象的发生。 Ustilago maydis 是一种生物营养植物病原体并感染寄主植物 Zea mays 。 U的生命周期。已证明maydis ...
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