| Streptavidin Bead Pulldown Assay to Determine Protein Homooligomerization
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Pulldown assay is a conventional method to determine protein-protein interactions in vitro. Expressing a protein of interest with two different tags allows testing whether both versions can be captured via one of the two tags as homooligomeric complex. This protocol is based on streptavidin bead capture of a biotinylated protein and co-associated Flag-tagged protein using Streptavidin MagBeads.
[摘要] Pulldown分析是一种常规的方法来确定蛋白质在体外的相互作用。 用两种不同的标签表达感兴趣的蛋白质可以检测两种标签是否可以通过两种标签之一作为同低聚体复合物来捕获。 该方案基于使用链霉抗生物素蛋白MagBeads的链霉抗生物素蛋白珠捕获生物素化蛋白质和共结合Flag标记蛋白质。
【背景】淀粉样前体蛋白（APP）可以通过其大的胞外结构域及其跨膜结构域形成同型二聚体，在生物学功能中起重要作用。 目前的方案已被用于表征APP跨膜C-末端99个氨基酸片段（C99）的同二聚化（Yan等人，2017）。 该检测的基本原理如图1所示：链霉亲和素包被的MagBeads可以捕获生物素化的蛋白质，这可以拉下相互作用蛋白质，并通过抗FLAG抗体检测。
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图1.基于MagBeads的pull-down测定的原理在该特定的方案中，使用生物素化的Avi-标记的C99蛋白和相关的C99-TEV位点-rTA-Flag蛋白质。
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| Synaptoneurosome Preparation from C57BL/6 Striata
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Author:
Date:
2016-02-20
[Abstract] Activity-dependent local mRNA translation endows synapses to remodel their structure and function (Bramham and Wells, 2007). This process is tightly controlled by the state of phosphorylation of several components of the translational machinery including initiation factors and ribosomal proteins (Buffington et al., 2014). The present protocol describes a method to prepare striatal synaptoneurosomes, from adult mice, containing both pre- and postsynaptic elements in which the level of synaptic phospho-proteins can be quantified (Biever et al., 2015).
[摘要] 活动依赖的局部mRNA翻译赋予突触重塑其结构和功能（Bramham和Wells，2007）。 该过程由包括起始因子和核糖体蛋白在内的翻译机理的几个组分的磷酸化状态来严格控制（Buffington等，2014）。 本方案描述了一种从成年小鼠制备纹状体synaptoneurosomes的方法，其含有可以量化突触磷酸蛋白水平的突触前和突触后元件（Biever等，2015）。
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