| Isolation of Rice Stripe Virus Preparation from Viruliferous Small Brown Planthoppers and Mechanic Inoculation on Rice
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Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract] Tenuiviruses can infect the plants of the family Poaceae, and cause serious loss of crops, particularly rice and maize, in South-Eastern Asian countries. Tenuiviruses usually depend on insect vectors for their transmission and cannot be transmitted between plants through wounds or abrasions. Rice stripe virus (RSV), a typical member of tenuiviruses, is efficiently transmitted by the small brown planthopper Laodelphax striatellus in a persistent-propagative manner to cause rice stripe disease. Here we presented a convenient method, the midrib micro-injection, to mechanically ...
[摘要] 细菌病毒可以感染禾本科植物，并在东南亚国家造成严重的作物损失，特别是稻米和玉米。 病毒通常依靠昆虫载体传播，不能通过伤口或擦伤传播。 水稻条纹病毒（RSV）是典型的tenuiviruses的成员，以持续繁殖的方式被小型褐飞虱灰飞虱高效率地传播，导致水稻条纹病。 在这里，我们提出了一种方便的方法，即中微量注射，以机械方式将昆虫来源的RSV接种到水稻叶中，以对水稻植物进行致病性测定。
【背景】除非通过根据不同的实验细节从1％至90％的完全不同的传输速率进行血管穿刺接种（Louie，1995; Hogenhout等人，2008），否则不能将机器接种到植物中。至于RSV，机械传播通常失败或产生低感染率（Ling，1972）。特别地，从病变植物注射RSV粗提物后，传播率仅为6％（Okuyama and Asuyama，1959）。在这项工作中提到的中微注射方法将RSV传播率提高到17％。虽然机械传播RSV的发生率仍远低于昆虫载体传播（53％），但是我们的方法为持续繁殖的植物病毒的机械接种提供了便利的方法。此外，基于这种方法，可以在受感染的植物宿主中更精确地确定持续增殖植物病毒的复制和基因表达，而不受昆虫即接种剂量和昆虫蛋白质的干扰。
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| Measurement of Inositol Triphosphate Levels from Rat Hippocampal Slices
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Author:
Date:
2016-04-05
[Abstract] Inositol triphosphate (IP3) is an important second messenger that participates in signal transduction pathways in diverse cell types including hippocampal neurons. Stimulation of phospholipase C in response to various stimuli (hormones, growth factors, neurotransmitters, neurotrophins, neuromodulators, odorants, light, etc.) results in hydrolysis of phosphatidylinositol 4, 5-bisphosphate (PIP2), a phospholipid that is located in the plasma membrane, and leads to the production of IP3 and diacylglycerol. Binding of IP3 to the IP3 ...
[摘要] 肌醇三磷酸（IP3）是参与信号转导途径的重要的第二信使，包括海马神经元在内的不同细胞类型。 刺激磷脂酶C对各种刺激（激素，生长因子，神经递质，神经营养因子，神经调节剂，气味剂，光等）的反应导致磷脂酰肌醇4,5-二磷酸（PIP2）的水解，磷脂位于质膜 ，并导致IP3和二酰基甘油的生产。 IP3与IP3受体（IP3R）的结合诱导Ca2 +从细胞内储存释放，并使细胞内Ca2 +依赖信号的启动。 在这里，我们描述了从大鼠海马切片制备的组织匀浆中测量细胞IP3水平的程序。
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| RAB21 Activity Assay Using GST-fused APPL1
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Author:
Date:
2016-02-20
[Abstract] The Rab family of small GTPases are essential regulators of membrane trafficking events. As with other small GTPase families, Rab GTPases cycle between an inactive GDP- bound state and an active GTP-bound state. Guanine nucleotide exchange factors (GEFs) promote Rab activation with the exchange of bound GDP for GTP, while GTPase-activating proteins (GAPs) regulate Rab inactivation with GTP hydrolysis. Numerous methods have been established to monitor the activation status of Rab GTPases. Of those, FRET-based methods are used to identify when and where a Rab GTPase is activated in cells. ...
[摘要] 小GTP酶的Rab家族是膜运输事件的必要调节剂。与其他小GTP酶家族一样，Rab GTP酶在不活动的GDP结合状态和活性GTP结合状态之间循环。鸟嘌呤核苷酸交换因子（GEF）促进Rab激活与交换绑定GDP GTP，而GTPase激活蛋白（GAP）调节Rab失活与GTP水解。已经建立了许多方法来监测Rab GTPases的活化状态。其中，基于FRET的方法用于鉴定细胞中Rab GTPase在何时和何地被激活。不幸的是，这种探针的产生是复杂的，并且只有有限数量的Rab已经以这种方式探测。来自细胞或组织提取物的活化的Rabs的生物化学纯化通过使用已知的Rab效应结构域以下拉特定的GTP结合的Rab形式是容易实现的。虽然这种方法不是理想的详细的亚细胞定位，它可以提供Rab活动的时间分辨率。越来越多的特异性效应物的鉴定现在允许在特定条件下测试许多Rab GTP酶的活化水平。在这里，我们描述了一种亲和纯化方法使用GST融合APPL1（一种已知的RAB21效应）来测试哺乳动物细胞中的RAB21激活。该方法成功地用于测定RAB21激活状态下营养丰富与饥饿条件下的变化，并测试在此过程中MTMR13 RAB21 GEF的需求。
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