| Analysis of Myosin II Minifilament Orientation at Epithelial Zonula Adherens
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Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] Non-muscle myosin II (NMII) form bipolar filaments, which bind F-actin to exert cellular contractility during physiological processes (Vicente-Manzanares et al., 2009). Using a combinatorial approach to fluorescently label both N- and C-termini of the NMII heavy chain, recent works have demonstrated the ability to visualize NMII bipolar filaments at various subcellular localizations (Ebrahim et al., 2013; Beach et al., 2014). At the zonula adherens (ZA) of epithelia, NMII minifilaments bind the circumferential actin bundles in a pseudo-sarcomeric manner (Ebrahim et ...
[摘要] 非肌肉肌球蛋白II（NMII）形成双极细丝，其在生理过程期间结合F-肌动蛋白以施加细胞收缩（Vicente-Manzanares等人，2009）。使用组合方法荧光标记NMII重链的N末端和C末端，最近的工作已经证明了在各种亚细胞定位下可视化NMII双极细丝的能力（Ebrahim等人，2013; Beach 等。，2014）。在上皮细胞粘附分子（ZA）上，NMII小丝以假性肌节方式结合周围肌动蛋白束（Ebrahim等人，2013），这是维持连接张力和组织完整性所需的构象Ratheesh等人，2012）。通过表达绿色荧光蛋白（GFP）-NMIIA重链并使用NMIIA C-末端特异性抗体对其进行免疫标记，我们能够观察到在Caco-2细胞中与F-肌动蛋白束结合的NMII小丝（Michael等人。，2016），如以前报道的（Ebrahim等人，2013; Beach 等人，2014）。此外，我们设计了FIJI/MATLAB分析模块来量化这些小丝相对于在ZA处的连接F-肌动蛋白的大小，距离和比对。小纤维角度的分散性的测量被证明是与结合处收缩性程度密切相关的有用参数（Michael等人，2016）。
关键词：肌球蛋白II微丝，结构照明显微镜，Adherens连接，肌动蛋白组织
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| VAMP8-3xHA Uptake Assay in HeLa Cells
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Author:
Date:
2016-02-20
[Abstract] Transmembrane proteins are rarely exclusively localized to a specific vesicle or an organelle. Most transmembrane proteins undergo complicated trafficking routes. Thus, transmembrane proteins are under constant flux, and at steady state, found on a variety of vesicles or organelles. This characteristic makes the study of their trafficking routes complex, since at any given moment, different molecules are often being trafficked in opposing directions. Pulse-chase experiments can temporally track a specific pool of a transmembrane protein of interest, allowing for the kinetic description of its ...
[摘要] 跨膜蛋白很少专门定位于特定的囊泡或细胞器。大多数跨膜蛋白经历复杂的运输路线。因此，跨膜蛋白在恒定通量下，并在稳定状态，发现在各种囊泡或细胞器。这个特征使得他们的贩运路线的研究复杂，因为在任何给定时刻，不同的分子通常在相反的方向上被贩运。脉冲追踪实验可以暂时跟踪感兴趣的跨膜蛋白的特定池，允许其运输路线的动力学描述。这种类型的技术已广泛用于跟踪大量的质膜定位蛋白质（Diril等人，2006; Jean等人，2010）。在这里，我们描述了一种方法，允许研究VAMP8贩运从质膜到内溶酶体隔室。该方法用于描述 MTMR13 和 RAB21 在调节VAMP8向内溶酶体的运输中的作用（Jean等人，，2015）。
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