| Measuring Mitochondrial ROS in Mammalian Cells with a Genetically Encoded Protein Sensor
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Author:
Date:
2018-01-20
[Abstract] Reactive oxygen species (ROS) are not only known for their toxic effects on cells, but they also play an important role as second messengers. As such, they control a variety of cellular functions such as proliferation, metabolism, differentiation and apoptosis. Thus, ROS are involved in the regulation of multiple physiological and pathophysiological processes. It is now apparent that there are transient and local changes in ROS in the cell; in so-called ‘microdomains’ or in specific cellular compartments, which affect signaling events. These ROS hotspots need to be studied in more depth to ...
[摘要] 活性氧（ROS）不仅以其对细胞的毒性作用而闻名，而且作为第二信使也起着重要的作用。如此，它们控制多种细胞功能，例如增殖，代谢，分化和凋亡。因此，ROS参与多种生理和病理生理过程的调节。现在很明显，细胞内存在ROS的短暂和局部变化;在所谓的“微域”或特定的细胞区室中，其影响信号传导事件。这些ROS热点需要更深入的研究，以了解其功能和规定。因此，有必要以高空间和时间分辨率在单个细胞中识别和量化氧化还原信号。遗传编码的基于荧光的蛋白质传感器提供了检测氧化还原信号传导过程的必要工具。这些传感器的一个很大的优势是可以针对他们。线粒体是能量代谢所必需的，并且是哺乳动物细胞中ROS的主要来源之一。因此，对这些细胞器中氧化还原电位和ROS产生的评估是非常有意义的。在此，我们提供了一个使用H 2 O 2特异性比例传感器mitoHyPer在贴壁哺乳动物细胞中。【背景】ROS是通过线粒体呼吸的副产物，通过电子从电子传递链泄漏而产生的。这些ROS被认为是有毒的，并导致脂质，蛋白质的氧化，并导致线粒体DNA损伤（Ralph et al。，2010; Bogeski等人，2016; Bogeski ，2014; Monika et al。，2015）。虽然线粒体作为新陈代谢，生物能量学和细胞死亡的枢纽，线粒体ROS作为调节多种细胞功能的第二信使的新兴作用也日益被接受（Chandel，2015; ...
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| Isolation, Culture and Differentiation of Adult Hippocampal Precursor Cells
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Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract] There are two neurogenic niches in the adult mammalian brain: the subventricular zone of the lateral ventricle and the subgranular zone of the hippocampal dentate gyrus. Cells from these areas can be isolated and maintained in vitro, using two different culture systems to assess their potential regarding proliferation and differentiation in a reductionist model. While the neurosphere assay is primarily performed to directly study the proliferative and differentiation potential of cells in individual brains, the monolayer culture allows single cell analysis in a rather homogeneous ...
[摘要] 成年哺乳动物脑中有两个神经生态位：侧脑室下脑室区和海马齿状回颗粒下区。 来自这些区域的细胞可以在体外分离和维持，使用两种不同的培养系统评估它们在还原模型中的增殖和分化的潜力。 虽然神经球测定主要是为了直接研究个体脑中细胞的增殖和分化潜能，单层培养允许在相当均匀的细胞群中进行单细胞分析。 在这里，我们描述了两个系统中的神经前体细胞的分离，培养方法和分化。
【背景】在哺乳动物脑中，成人神经干细胞存在于两个主要神经生态位中，即海马齿状回（DG）的下颗粒区（SGZ）和室下区（SVZ）的侧脑室，其允许新生神经元成人的大脑。来自神经生态位的神经前体细胞可以在体外分离和培养以模拟细胞过程，尤其是增殖和分化。两种标准培养系统，贴壁单层培养（Palmer等人，1995; Ray等人，1995）和神经球测定（Reynolds和Weiss，1992和1996 ）在20世纪90年代被引入，代表了在体外研究神经祖细胞生物学的有价值的工具。
根据研究问题，每个系统都有其优点和缺点，在选择其中一种或另一种培养方法之前应该仔细考虑。在贴壁单层培养中，细胞生长相当孤立，形成更均匀的培养物。单层允许直接调查和监测单细胞水平的神经前体细胞。受控条件下的形态，增殖和分化等特征可以很容易地分析和可视化。然而，与神经球培养物相比，以单层培养的细胞代表更复杂的模型，因为细胞通常以更少的通常存在于细胞壁中的细胞 ...
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| Differentiation of Human Embryonic Stem Cells into Cone Photoreceptors
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Author:
Date:
2016-07-20
[Abstract] Photoreceptors are specialized retinal neurons able to respond to light in order to generate visual information. Among photoreceptors, cones are involved in colors discrimination and high-resolution central vision and are selectively depleted in macular degenerations and cone dystrophies. A possible therapeutic solution for these disorders is to replace degenerating cells with functional cones. Here, we describe a simple protocol for the rapid production of large amount of cone photoreceptors from human pluripotent stem cells. The differentiation protocol is based on the “default pathway” of ...
[摘要] 光感受器是能够响应光以产生视觉信息的专门的视网膜神经元。 在光感受器中，视锥细胞参与颜色辨别和高分辨率中心视觉，并且选择性缺失黄斑变性和视锥营养不良。 这些疾病的可能的治疗溶液是用功能性锥体代替变性细胞。 在这里，我们描述了一个简单的协议，从人类多能干细胞快速生产大量的锥形感光细胞。 分化方案基于使用BMP，TGFβ和WNT拮抗剂COCO的神经诱导的"默认途径"。
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