| Isolation and Purification of Schwann Cells from Spinal Nerves of Neonatal Rat
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Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract] Primary cultured Schwann cells (SCs) are widely used in the investigation of the biology of SC and are important seed cells for neural tissue engineering. Here, we describe a novel protocol for harvesting primary cultured SCs from neonatal Sprague-Dawley (SD) rats. In the present protocol, dissociated SCs are isolated from the spinal nerves of neonatal rats and purified by the treatment of cytosine arabinoside (AraC).
[摘要] 原代培养的雪旺氏细胞（SCs）广泛用于SC的生物学研究，是神经组织工程的重要种子细胞。 在这里，我们描述了从新生Sprague-Dawley（SD）大鼠中收获原代培养的SC的新方案。 在本方案中，解离的SCs从新生大鼠的脊神经中分离并通过治疗阿糖胞苷（AraC）进行纯化。
【背景】SC是周围神经系统（PNS）的神经胶质细胞。主要SCs的分离和纯化是研究SC生物学的关键步骤。此外，纯化的原代培养的SC是用于神经组织工程的重要种子细胞。迄今为止，已经基于Brockes（Brockes等人，1979）的方法报道了培养SC的各种方法。通过报道的方法，坐骨神经主要用于SC隔离，因为它们尺寸大并且可以容易地获得。然而，坐骨神经的SC容易被成纤维细胞污染，因为结缔组织难以清除。特别是神经管和神经束是成纤维细胞的主要来源。没有特殊处理，污染的成纤维细胞比SCs快得多，并且将很快成为培养物中主要的细胞。在过去几十年中，已经开发出许多用于从污染成纤维细胞中分离SC的纯化方法。这些纯化方法的细节包括单一或组合的抗有丝分裂处理（Wood，1976），抗体介导的细胞溶解（Brockes等人，1979），免疫选择（Assouline等人，，1983; ...
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| Preparation of Teased Nerve Fibers from Rat Sciatic Nerve
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Author:
Date:
2017-10-05
[Abstract] Compared to tissue sectioning techniques, the technique of teasing single nerve fibers provides a better way to understand the structures of myelin sheaths and axons of the peripheral myelinated nerves. This protocol describes a method for preparation of teased single nerve fibers from rat sciatic nerve. In this protocol, fixed nerves are teased into single individual fibers and arranged onto adhesion microscope slides for further immuno-staining.
[摘要] 与组织切片技术相比，单神经纤维的技术提供了更好的方法来了解髓鞘和外周髓鞘神经的轴突的结构。 该方案描述了一种从大鼠坐骨神经制备调节的单神经纤维的方法。 在该方案中，将固定的神经梳理成单个单独的纤维并排列在粘附显微镜载玻片上用于进一步的免疫染色。
【背景】外周神经系统中的雪旺氏细胞围绕轴突包裹以形成绝缘髓鞘，其允许动作电位的快速传导。 显着的多层髓鞘由精细的结构组成，包括紧密的鞘，施密特 - 兰特曼切口，Cajal带，内外侧mesaxons，以及在paranodal区域的结构。 为了阐明外周神经有髓纤维的正常和异常结构，需要使用切割的神经纤维。 拔牙纤维的方法已被广泛应用于人类和啮齿类动物周围神经的研究。 在这个协议中，我们描述了一种将周围神经分为单纤维的方法，用于对周围神经的轴突或髓鞘进行进一步的形态学研究。
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| Protocol for Establishing a Multiplex Image-based Autophagy RNAi Screen in Cell Cultures
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] Autophagy is a recycling pathway, in which intracellular cargoes including protein aggregates and bacteria are engulfed by autophagosomes and subsequently degraded after fusion with lysosomes. Dysregulation of this process is involved in several human diseases such as cancer or neurodegeneration. Hence, advancing our understanding of how autophagy is regulated provides an opportunity to explore druggable targets and subsequently develop treatment strategies for these diseases. To identify novel autophagy regulators, we developed an image-based phenotypic RNAi screening approach using ...
[摘要] 自噬是一种循环途径，其中细胞内货物包括蛋白质聚集体和细菌被自噬吞噬，随后与溶酶体融合后降解。这种过程的失调涉及几种人类疾病，如癌症或神经退行性疾病。因此，提高我们对自噬如何监管的理解提供了探索可药用靶标的机会，并随后制定了这些疾病的治疗策略。为了鉴定新的自噬调节因子，我们开发了一种基于图像的表型RNAi筛选方法，在内源水平上使用自噬标记蛋白（Jung et al。，2017）。与以前进行的自噬屏幕相比，该方法不使用过表达标记的自噬标记蛋白，而是在内源水平检测自噬结构。此外，我们同时监测自噬的早期和晚期阶段，而其他筛选仅使用单个自噬体标志物大多为GFP-LC3B。在这里，我们详细描述了这种多重筛选方案，并讨论了如何建立基于图像的siRNA筛选的一般考虑。
【背景】自噬是一种细胞内质量和数量控制途径，通过这种途径，多种细胞溶质材料如病原体，细胞器或其部分，蛋白质和其他大分子被双重膜结构所吞噬，造成自噬体，并在自噬体与溶酶体融合后进行大量溶酶体降解。自体吞噬体的形成及其对自体溶酶体的成熟是一个高度规范的过程。在酵母中最初鉴定的AuTophaGy相关（ATG）基因是泛蛋白样蛋白Atg8，其通过与位于受体自噬体中的磷脂磷脂酰乙醇胺（PE）的可逆缀合以高度局部化的方式发挥其功能。人类细胞含有六个ATG8家族成员，可以分为两个亚科：i）微管相关蛋白1A / ...
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