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Author:
Date:
2013-06-20
[Abstract] Trypanosome mitochondrial genome, known as Kinetoplast DNA (kDNA), is a massive network of interlocked DNA rings. The studies of kDNA replication and architecture are of major significance since kDNA is a valid drug target. However, DNA in procyclic trypanosomes can not be labeled with tracer concentrations of 3[H]-thymidine, possibly because they lack a high-affinity transporter for thymidine. Therefore, BrdU, a thymidine analog, has been used at high concentrations to study kDNA replication. However, the detection of BrdU with anti-BrdU antibody requires harsh conditions such as ...
[摘要] 锥虫体线粒体基因组，称为Kinetoplast DNA（kDNA），是互锁DNA环的大块网络。 kDNA复制和结构的研究具有重要意义，因为kDNA是有效的药物靶标。然而，在循环锥虫中的DNA不能用示踪剂浓度的3 H] - 胸苷标记，可能是因为它们缺少用于胸苷的高亲和性转运蛋白。因此，已经以高浓度使用BrdU（胸苷类似物）来研究kDNA复制。然而，用抗BrdU抗体检测BrdU需要苛刻的条件，例如分离双DNA链的酸或热处理，其影响其它抗体结合的能力以及需要dsDNA结合的染料的形态和能力有效率的。相反，EdU（5-乙炔基-2'-脱氧尿苷），一种新的胸苷类似物，可以用于研究kDNA复制和细胞增殖与简化的协议。 EdU的检测基于点击反应，其是叠氮化物和炔之间的铜（I）催化反应。这种点击反应不需要DNA变性，并且是多重兼容的，例如用于细胞周期分析的其他抗体和染料。为了显现锥虫复制的核DNA和kDNA，将EdU加入细胞培养基的培养基中，孵育0.5小时至3小时，然后通过以下程序检测。
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