| GC/MS-based Analysis of Volatile Metabolic Profile Along in vitro Differentiation of Human Induced Pluripotent Stem Cells
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) are a promising tool in cell-based therapies for degenerative diseases. A safe application of hiPSCs in vivo, requires the detection of the presence of residual undifferentiated pluripotent cells that can potentially cause the insurgence of teratomas. Several studies point out that metabolic products may provide an alternative method to identify the different steps of cells differentiation. In particular, the analysis of volatile organic compounds (VOCs) is gaining a growing interest in this context, thanks to its inherent ...
[摘要] 人诱导的多能干细胞（hiPSC）是用于退化性疾病的基于细胞的疗法中的有前景的工具。 hiPSCs在体内的安全应用需要检测残留未分化多能细胞的存在，这可能会导致畸胎瘤的爆发。几项研究指出，代谢产物可能提供了另一种方法来确定细胞分化的不同步骤。特别是挥发性有机化合物（VOCs）的分析由于其固有的非侵入性而在这方面越来越受到关注。在这里，说明了从人诱导的多能干细胞（hiPSC）分析VOC的方案。它基于固相微萃取（SPME）技术与气相色谱 - 质谱联用（GC / MS）。该方法用于测量从绒毛膜样品（CVS）到hiPSC的细胞重编程期间和沿着hiPSC体外分化成早期神经祖细胞（NP）的细胞顶空中的挥发性代谢物修饰，穿过胚状体机构（EBs）的形成。
【背景】提出细胞代谢作为在分化的各个步骤期间研究干细胞的替代物。事实上，假设干细胞从多能性向完全分化的转变可能引起代谢产物的剧烈变化是合理的。在诱导的多能干细胞，亲本成纤维细胞和胚胎干细胞之间观察到了这种假设的第一个证据（Meissen等人，2012）。
在代谢产物中，挥发性有机化合物（VOC）吸引了人们对其收集的简单性，内在的非侵入性和广泛的分析方法的广泛关注（Boots et。，2015 ...
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| Isolation and Expansion of Mesenchymal Stem Cells from Murine Adipose Tissue
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] Mesenchymal stem cells (MSCs) are currently intensively studied due to significant promise which they represent for successful implementations of future cell therapy clinical protocols. This in turn emphasizes importance of careful preclinical studies of MSC effects in various murine disease models. The appropriate cell preparations with reproducible biological properties are important to minimize variability of results of experimental cell therapies. We describe here a simple protocol for isolation of murine MSCs from adipose tissues and their reproducible multi-log expansion under hypoxia ...
[摘要] 间充质干细胞（MSC）目前正在深入研究，因为它们代表未来细胞治疗临床方案的成功实施的重大前景。 这又强调了对各种鼠疾病模型中MSC效应的仔细临床前研究的重要性。 具有可重现的生物学性质的合适的细胞制剂对于最小化实验细胞疗法结果的变异性是重要的。 我们在这里描述了一种用于从脂肪组织中分离鼠MSC的简单方案及其在缺氧条件下的可重复的多对数扩增。
【背景】最初由Friedenstein鉴定的MSC是成纤维细胞样形态的骨髓细胞，粘附于塑料和高自我更新能力，导致体外成纤维细胞样集落的形成（Friedenstein等，1976; Review in Phinney andSensebé ，2013）。 MSCs由于其在医学上的潜在应用，目前是研究最成熟的成体祖细胞类型之一。这些细胞可以从各种器官中分离（Murray等，2014），并且被认为是源于血管，以周细胞或血管壁细胞。除了能够沿着成骨，脂肪形成和软骨形成谱系分化的能力之外，MSC具有免疫调节特性，并且被认为参与对组织损伤的反应，以及通过其影响巨噬细胞极化的能力来组织抗炎反应（Prockop，2013; Caplan，2016）。
鉴于这些特性，MSCs代表了未来相关细胞治疗临床方案的成功实施的巨大前景。这反过来强调了在各种鼠疾病模型中使用MSC进行仔细临床前研究的重要性。制备大量具有可重复生物学特性的合适细胞样品的能力对于在开发基于MSC的实验细胞疗法期间最小化结果的变异性至关重要。然而，与具有强抗氧化防御性并因此在大气氧条件下相当好的人类MSC不同，小鼠MSC对氧应激更敏感，并且在常规CO2培养箱中培养时具有有限的寿命和扩张能力。相反，在缺氧条件下培养这些细胞，相反，显着延长了它们的寿命，并允许多对数扩增，提供足够量的具有可重复性质的细胞材料，用于用鼠实验疾病模型重复实验（Boregowda等，2012; ...
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| Formaldehyde Fixation of Extracellular Matrix Protein Layers for Enhanced Primary Cell Growth
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Coating tissue culture vessels with the components of the extracellular matrix such as fibronectin and collagens provides a more natural environment for primary cells in vitro and stimulates their proliferation. However, the effects of such protein layers are usually rather modest, which might be explained by the loss immobilized proteins due to their weak non-covalent association with the tissue culture plastic. Here we describe a simple protocol for a controlled fixation of fibronectin, vitronectin and collagen IV layers by formaldehyde, which substantially enhances the stimulation ...
[摘要] 用诸如纤连蛋白和胶原的细胞外基质的组分涂覆组织培养容器为体外原代细胞提供更自然的环境并刺激它们的增殖。 然而，这种蛋白质层的作用通常相当适中，这可能由于与组织培养塑料的非共价结合弱而被固定蛋白质损失所解释。 在这里我们描述一个简单的协议，通过甲醛控制纤维连接蛋白，玻连蛋白和胶原IV层的固定，这大大增强了这些细胞外蛋白对原代细胞增殖的刺激。
【背景】细胞外基质（ECM）如纤连蛋白，层粘连蛋白，玻连蛋白和胶原蛋白的组分通常用于包被组织培养容器，因为它们为体外原代细胞提供更自然的环境并刺激它们的增殖（ Sawada等人，1987; ...
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