| Co-immunostaining of ICAM-1, ICAM-2, and CD31 in Mouse Kidney Glomeruli
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Author:
Date:
2020-07-05
[Abstract] Glomerulonephritis (GN) is a common pathological condition in chronic kidney diseases that often leads to end stage renal failure. Mac-1 (CD11b/CD18)-mediated neutrophil, macrophage, and dendritic cell glomerular infiltration leading to cellular dysfunction and destruction is an important disease mechanism. The cellular distribution and dynamics of the expression of Mac-1 ligands ICAM-1 and ICAM-2 in GN have not been well studied because of the difficulties in tissue staining and colocalizing glomerular cells with surface antigens. To improve the visualization of cell surface marker and ...
[摘要] [摘要 ] 肾小球肾炎（GN）是慢性肾脏疾病的常见病理状况，通常会导致晚期肾衰竭。Mac-1（CD11b / CD18）介导的嗜中性粒细胞，巨噬细胞和树突状细胞肾小球浸润导致细胞功能障碍和破坏是重要的疾病机制。由于在组织染色和肾小球细胞与表面抗原共定位方面存在困难，因此尚未对GN中Mac-1配体ICAM-1和ICAM-2的表达进行细胞分布和动力学研究。为了改善肾脏区室中细胞表面标志物和抗原表达的可视化，我们设计了一种均匀而温和的固定方法，即使用对甲醛-高赖氨酸-高碘酸盐（PLP）灌注。一大批针对细胞表面标志物的抗体（Ab）用于鉴定肾细胞类型和粘附分子。当使用共聚焦显微镜观察肾小球粘附分子染色时，发现内皮细胞特异性表达CD31，并且这些细胞组成性表达ICAM-2。尽管ICAM-1在稳态中不由肾小球内皮细胞表达，但在患有慢性GN和严重蛋白尿的小鼠中ICAM-1高度上调。VCAM-1是在白细胞迁移中重要的VLA-4配体，未在肾小球中表达。结果强调了ICAM-1在巨噬细胞和树突状细胞浸润中的重要性。cGN 。该报告将为产生高质量共聚焦图像以及鉴定和定量在不同肾区室和细胞类型中表达的受体和其他细胞抗原提供广泛适用的程序。
[背景 ] ...
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| Quantification of Neisseria meningitidis Adherence to Human Epithelial Cells by Colony Counting
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] To cause an infection, the human specific pathogen Neisseria meningitides must first colonize the nasopharynx. Upon tight interaction with the mucosal epithelium, N. meningitidis may cross the epithelial cellular barrier, reach the bloodstream and cause sepsis and/or meningitis. Since N. meningitidis niche is restricted to humans the availability of relevant animal models to study host-pathogen interactions are limiting. Therefore, most findings that involve N. meningitidis colonization derive from studies using cultured human cell lines. Human epithelial ...
[摘要] 为了引起感染，人类特定的病原体脑膜炎奈瑟氏脑必须首先在鼻咽中定居。 与粘膜上皮紧密相互作用时， 脑膜炎双球菌可能穿过上皮细胞屏障，到达血流并引起败血症和/或脑膜炎。 由于 N meningitidis niche限于人类。 因此，大多数涉及N 脑膜炎菌群定植来源于使用培养的人类细胞系的研究。 在最初的病原体坚持。 在这里，我们描述了一个标准协议来量化N的遵守情况。 脑膜炎双球菌对上皮细胞FaDu细胞的作用。 感染后收集的细胞裂解物的集落计数用于量化对上皮细胞的粘附。
【背景】作为细菌发病机制的重要一步。细菌粘附素与宿主细胞表面受体之间的分子相互作用决定了定植位点（Soto and Hultgren，1999）。鼻咽中的上皮层形成人类限制性病原体N的第一个细胞屏障。 meningitidis 遇到和无症状殖民。牢固粘附，并与宿主细胞相互作用可导致上皮细胞和进入血液的渗透，在危及生命的败血症和/或脑膜炎（斯蒂芬斯，2009）得到的。从细菌膜延伸出来的长细丝（称为IV型菌毛（Tfp））与PilC1尖端定位的粘附素在初始依从性中起关键作用。脑膜炎到鼻咽上皮细胞（Marceau等，1995; Rudel等，1995）。 Tfp不仅促进与宿主细胞的相互作用，而且参与细菌聚集体的发育，这可以有助于高水平的粘附和抵抗剪切应力（Helaine等，2005，Mikaty ...
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| A Novel Protocol to Quantitatively Measure the Endocytic Trafficking of Amyloid Precursor Protein (APP) in Polarized Primary Neurons with Sub-cellular Resolution
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Alzheimer’s disease’s established primary trigger is β-amyloid (Aβ) (Mucke and Selkoe, 2012). The amyloid precursor protein (APP) endocytosis is required for Aβ generation at early endosomes (Rajendran and Annaert, 2012). APP retention at endosomes depends on its sorting for degradation in lysosomes (Haass et al., 1992; Morel et al., 2013; Edgar et al., 2015; Ubelmann et al., 2017). The following endocytosis assay has been optimized to assess the amyloid precursor protein (APP) endocytosis and degradation by live murine cortical primary neurons (Ubelmann et ...
[摘要] 阿尔茨海默病确定的主要触发因素是β-淀粉样蛋白（Aβ）（Mucke和Selkoe，2012）。 淀粉样蛋白前体蛋白（APP）内吞作用是在早期内体中产生Aβ所必需的（Rajendran和Annaert，2012）。 内涵体上的APP保留取决于其对溶酶体中的降解的分选（Haass等人，1992; Morel等人，2013; Edgar等人， 2015年; Ubelmann等人，2017年）。 已经优化了以下内吞作用测定法以评估活的小鼠皮层原代神经元的淀粉状蛋白前体蛋白（APP）内吞作用和降解（Ubelmann等人，2017）。
【背景】Aβ42积聚是阿尔茨海默病的主要触发因素。 APP的胞吞作用需要Aβ42代（辜和Squazzo，1994; Grbovic 等人，2003; Cirrito 等人，2008;拉金德伦等人，2008）。已经通过表面蛋白的经典生物素化在脉冲追踪动力学实验中分析了APP的内吞作用（Sannerud等人，2011; Xiao等人，2012; Sullivan等人，2014），在单细胞中通过使用针对APP的N-末端胞外结构域的抗体（Yamazaki等人，1995; Xiao ，2012）。这些研究中的大多数使用非神经元细胞（Yamazaki等人，1996; Lee等人，2008; Sullivan等人， ...
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