| Total RNA Extraction from Grape Berry Skin for Quantitative Reverse Transcription PCR and Microarray Analysis
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Author:
Date:
2016-04-05
[Abstract] Extraction of high quality RNA is an essential step for quantitative reverse transcription PCR (qRT-PCR) and microarray analysis. However, it is not easy to extract high quality RNA from fruit materials, which contain high amounts of polysaccharides, lipids and secondary metabolites. Wan and Wilkins (1994) had developed ‘Hot Borate Method’ to isolate high quality RNA. Here, we describe a modified protocol of the ‘Hot Borate Method’ to isolate high quality RNA from grape berry skin for qRT-PCR and microarray analysis (Suzuki et al., 2015a; Suzuki et al., 2015b).
[摘要] 高质量RNA的提取是定量逆转录PCR（qRT-PCR）和微阵列分析的必要步骤。 然而，从含有大量多糖，脂质和次级代谢物的水果材料中提取高质量RNA是不容易的。 Wan和Wilkins（1994）开发了"热硼酸盐方法"来分离高质量的RNA。 在这里，我们描述了"热硼酸盐方法"的修饰的协议，从葡萄浆果皮肤中分离高质量的RNA用于qRT-PCR和微阵列分析（Suzuki等人，2015a; Suzuki等人 al。，2015b）。
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| Small-scale Triton X-114 Extraction of Hydrophobic Proteins
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Author:
Date:
2014-06-05
[Abstract] Here we introduce a protocol for Triton X-114 extraction which we used in our recently-published paper (Taguchi et al., 2013). It is a versatile method to concentrate or partially purify hydrophobic proteins. The presented protocol is based on the protocol published by Bordier (Bordier, 1981) but more simplified and down-scaled for more small-scale and simpler use (Taguchi et al., 2013).
Triton X-114 (TX114) is a non-ionic detergent which has a relatively low clouding point at 22 °C and separates into detergent (Det) and aqueous (Aq) phase at temperatures above ...
[摘要] 在这里我们介绍一个Triton X-114提取的协议，我们在我们最近发表的论文中使用它（Taguchi等人，2013年）。它是集中或部分纯化疏水蛋白的通用方法。所提出的协议基于由Bordier（Bordier，1981）公布的协议，但是对于更小规模和更简单的使用更加简化和缩小（Taguchi等人，2013） > Triton X-114（TX114）是非离子型洗涤剂，在22℃下具有相对低的浊点，在高于浊点的温度下分离成洗涤剂（Det）和水相（Aq）。在相分离期间，TX114溶液中的疏水性溶质被隔离到Det相，而亲水性溶质被隔离到Aq相。利用这种现象，TX114提取是一种非常通用的技术，有效地集中疏水蛋白，特别是糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定蛋白像朊蛋白（PrP），因为他们有大量的高度疏水性部分。此外，使用TX114的相分离可耐受各种条件，例如不同pH或相对低浓度的盐酸胍。由于只要发生相分离，疏水性蛋白就被螯合到Det相，并且如果感兴趣的蛋白质的疏水性不受pH或变性剂的影响，该技术也可以用于改变缓冲液或去除变性剂。当使用在洗涤剂溶液中维持活性的酶或蛋白酶时，TX114也可以用于通过蛋白质的酶消化来分离疏水性和水溶性亲水部分，如通过使用体外PrP消化PrP与磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C（Taguchi等人，2013）。
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