| Immunoprecipitation of Proteins in Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2015-04-05
[Abstract] Immunoprecipitation (IP) is a biochemical technique to precipitate a protein out of solution using an antigen that can specifically bind to that protein. IP can be performed to isolate and concentrate one particular protein from a sample of thousands of different proteins. IP is also readily performed to pull down interacting proteins of complexes out of solution. This protocol outlines the methods used to IP proteins in whole worm lysates and their preparation for detection on Western blots using denaturing conditions.
[摘要] 免疫沉淀（IP）是使用可以特异性结合该蛋白质的抗原将蛋白质从溶液中沉淀出来的生物化学技术。 IP可以从数千种不同蛋白质的样品中分离和浓缩一种特定蛋白质。 IP也容易进行以从溶液中取出复合物的相互作用蛋白。 该协议概述了用于IP蛋白在整个蠕虫裂解物中的方法及其用于使用变性条件在蛋白质印迹上检测的方法。
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| Gastric Aspiration Models
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Author:
Date:
2013-11-20
[Abstract] The procedures described below are for producing gastric aspiration pneumonitis in mice with alterations for rats and rabbits described parenthetically. We use 4 different injury vehicles delivered intratracheally to investigate the inflammatory responses to gastric aspiration:
1) Normal saline (NS) as the injury vehicle control
2) NS + HCl, pH = 1.25 (acid)
3) NS + gastric particles, pH ≈ 5.3 (part.)
4) NS + gastric particles + HCl, pH = 1.25 (acid + ...
[摘要] 下面描述的方法用于在小鼠中产生胃吸入性肺炎，其中大鼠和家兔进行了改变。我们使用4种不同的伤口车内气道来调查胃抽吸的炎症反应：
1）生理盐水（NS）作为损伤车辆对照
2）NS + HCl，pH = 1.25（酸）
3）NS +胃颗粒，pH≈5.3（部分）
4）NS +胃颗粒+ HCl，pH = 1.25（酸+部分）
体积，pH值和胃液浓度都会影响所产生的肺损伤。在小鼠中，我们通常使用的损伤体积为3.6ml / kg（大鼠：1.2ml / kg，兔子：2.4ml / kg），伤害pH（含酸载体）为1.25，胃颗粒浓度在含颗粒的载体中）10mg / ml（大鼠：40mg / ml）。在我们手中，这导致了最大，非致命的肺损伤，对于最有害的车辆（即酸+部分），死亡率低于10％。最大可耐受的颗粒浓度需要根据经验确定任何新的菌株的使用，特别是在遗传改变的小鼠中，因为改变的炎症反应可能对死亡率有不利影响。
我们在C57BL / 6背景下，在近交系CD-1以及许多遗传修饰的近交染色体上使用了这些方法。应该仔细考虑应变的选择，特别是在应变特异性免疫偏倚方面，以确保适当的数据解释。受伤时，小鼠的大小应≥20 ...
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