| Double Labeling of PDGFR-β and α-SMA in Swine Models of Acute Kidney Injury to Detect Pericyte-to-Myofibroblast Transdifferentation as Early Marker of Fibrosis
|
|
Author:
Date:
2020-10-05
[Abstract] Growing evidences suggest that peritubular capillaries pericytes are the main source of scar-forming myofibroblasts during chronic kidney disease (CKD), as well as early phases of acute kidney injury (AKI). In a swine model of sepsis and I/R (Ischemia Reperfusion) injury-induced AKI we demonstrated that renal pericytes are able to transdifferentiate toward α-SMA+ myofibroblasts leading to interstitial fibrosis. Even if precise pericytes identification requires transmission electron microscopy and the co-immunostaining of several markers (i.e., Gli, NG2 chondroitin sulphate ...
[摘要] [摘要]越来越多的证据表明，肾小管周围的毛细血管周细胞是慢性肾脏病（CKD）以及急性肾损伤（AKI）早期形成疤痕的成纤维细胞的主要来源。在败血症和I / R（缺血再灌注）损伤诱导的AKI的猪模型中，我们证明了肾周细胞能够向α- SMA +肌成纤维细胞转分化，从而导致间质纤维化。即使精确周细胞识别需要透射电子显微镜和几个标志物联合免疫（即。，的Gli ，NG2硫酸软骨素蛋白聚糖，CD146，结蛋白或CD73）和新兴的新的标志物（CD248或TEM1，唾液酸蛋白），以往的研究表明，PDGFR-β可用作肾周细胞表征的标志物。最近，对PDGFR-β和α-SMA进行了双重免疫荧光染色，以鉴定在纤维化发展的早期受损激活的周细胞（PDGFR-β + /α-SMA +细胞）。我们的数据强调了肾周细胞在败血症和I / R相关性AKI的生理病理中的关键作用。在该协议中，我们描述了猪福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）肾脏活检中PDGFR-β和α-SMA双重免疫荧光染色的程序以及图像分析和定量方法。
[背景】肾脏纤维化被认为是主要负责肾脏疾病的进展，其与肾的损伤后的容量有限，再生有关。进行性肾脏疾病中间质纤维化的主要来源（Simone等人，2014 ; ...
|
|
|
| Primary Cultures from Human GH-secreting or Clinically Non-functioning Pituitary Adenomas
|
|
Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract] Pituitary adenomas are among the more frequent intracranial tumors usually treated with both surgical and pharmacological–based on somatostatin and dopamine agonists–approaches. Although mostly benign tumors, the occurrence of invasive behaviors is often detected resulting in poorer prognosis. The use of primary cultures from human pituitary adenomas represented a significant advancement in the knowledge of the mechanisms of their development and in the definition of the determinants of their pharmacological sensitivity. Moreover, recent studies identified also in pituitary adenomas putative ...
[摘要] 垂体腺瘤是更常见的颅内肿瘤之一，通常用基于生长抑素和多巴胺激动剂手术的手术和药物治疗。 虽然多为良性肿瘤，但侵入性行为的发生常常被检测到，导致预后较差。 来自人类垂体腺瘤的原代培养物的使用代表了对其发育机制的知识以及其药理敏感性决定因素的定义方面的显着进步。 此外，最近的研究也在垂体腺瘤中发现了假定的肿瘤干细胞，根据目前的假设，它代表了根除大多数恶性肿瘤的真实细胞靶标。 在这个协议中，我们描述了从人垂体腺瘤建立原代培养的程序，以及如何选择，体外扩增和表型鉴定推定的垂体腺瘤干细胞。
【背景】垂体腺瘤是最常见的颅内肿瘤之一（高达15％），横断面研究发现每100,000名居民中约有90例发病，其中绝大多数为30岁以上的成年人。大约10％的未经选择的垂体在尸检时进行了检查（即考虑到之前未诊断为垂体疾病的受试者的垂体）（ ，Molitch，2017）。尽管通常为良性肿瘤，但垂体腺瘤的处理可因与激素分泌过多相关的临床综合征或发展以治疗抗性，高增殖率，快速复发和绒毛外侵袭为特征的侵袭行为而复杂化（Carreno等人，2017）。成年垂体干细胞的持续存在（Florio，2011）导致垂体腺瘤（以及可能的其他良性瘤形成）的发展可以源自具有干细胞特性（主要是自我更新和分化）的肿瘤细胞的亚群能力），正如已经建立的恶性固体和血液肿瘤一样。
最近的实验证据表明，癌症干细胞（CSC）范例也适用于人和小鼠垂体腺瘤（Donangelo等人，2014; ...
|
|
|
| Determination of DNA Damage in the Retina Photoreceptors of Drosophila
|
|
Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] The retina is sensitive for light damages, because of direct light exposure, especially intense blue and UV light, which increase level of ROS and other toxic phototransduction products in photoreceptor cells. In our previous work (Damulewicz et al., 2017a and 2017b), we used 8-oxo-deoxyguanosine (8-OHdG) as a marker for oxidative stress to investigate the role of heme oxygenase in DNA protection against UV light. In this protocol, we showed how to determine the level of DNA damages in the retina using immunohistochemical staining.
[摘要] 视网膜对光损伤敏感，因为直接光照，尤其是强烈的蓝光和紫外光，这增加了光感受器细胞中ROS和其它有毒光转导产物的水平。 在我们以前的工作（Damulewicz等人，2017a和2017b）中，我们使用8-氧代 - 脱氧鸟苷（8-OHdG）作为氧化应激的标记来研究血红素加氧酶在DNA保护中的作用 防紫外线。 在这个协议中，我们展示了如何使用免疫组织化学染色来确定视网膜中DNA损伤的水平。
【背景】脱氧核糖核酸（DNA）是所有生物体的必需分子。它含有遗传密码，其中含有对生物体结构和代谢所必需的蛋白质和其他分子的说明。 DNA由两条核苷酸链组成。每种核苷酸是四种类型的核苷碱基（胞嘧啶，鸟嘌呤，腺嘌呤和胸腺嘧啶），脱氧核糖和磷酸酯基团中的一种。 DNA结构中的物理和化学变化被归类为DNA损伤。它包括一个或两个DNA断裂链，缺少核碱基的核苷酸或化学变化。损坏可能是由于环境因素诱导，如化学物质或UV光暴露，或在代谢过程，其产生活性氧，活性氮物质，反应性羰基物质和烷化剂（德邦特和van Larebeke，2004）的结果。
其中最常见的DNA损伤是-8-氧代脱氧鸟苷（8-OHdG的），所有这些是由活性氧物种的DNA氧化的产物，它作为氧化应激（德索萨-Pinto的等的标记。 ，2001，Swenberg等人，2011; ...
|
|
|