| Plate Assay to Determine Caenorhabditis elegans Response to Water Soluble and Volatile Chemicals
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Author:
Date:
2018-02-20
[Abstract] The nematode Caenorhabditis elegans is widely used for behavioral studies ranging from simple chemosensation to associative learning and memory. It is vital for such studies to determine optimal concentrations of attractive and aversive chemicals that C. elegans can sense. Here we describe a resource localization assay in which a chemical compound of interest is placed in two compartments of a quadrant plate in order to determine optimal concentrations of the chemical in behavioral studies. Using the assay, we determined the optimal concentration of a water-soluble ...
[摘要] 线虫<秀秀隐杆线虫广泛用于从简单的化学感应到联想学习和记忆的行为研究。 这些研究对于确定吸引和厌恶化学物质的最佳浓度至关重要。="" 线虫可以感觉到。="" 在这里我们描述了一种资源定位测定法，其中将感兴趣的化学化合物置于象限板的两个隔室中以确定化学品在行为研究中的最佳浓度。="" 使用该测定，我们确定了水溶性引诱剂kcl的最佳浓度，作为研究关联学习和记忆的无条件刺激。="">
【背景】线虫线虫广泛用作动物行为研究的模式生物。 ℃。秀丽隐杆线虫感知主要由最大的化学感受器官（Ward，1973; Dusenbery，1974; Bargmann和Horvitz，1991; Bargmann等人）等介导的各种水溶性和挥发性化学物质。 1993）。行为研究必须确定可以被感知的化学物质的精确浓度。线虫。为了确定用于C的水溶性引诱剂的最佳浓度。线虫，Wicks等人（2000）使用象限琼脂平板进行行为测定，其中感兴趣的化学物质与琼脂在两个隔室中混合，并且该测定已广泛用于许多化学品（例如Jansen等人，2002; Ortiz等人，2009; Murayama和Maruyama，2013; Sassa＆lt; em＆gt; et al。，2013）。趋化性分析也被用于测量C的敏感性。 ...
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| Cell Type-specific Metabolic Labeling of Proteins with Azidonorleucine in Drosophila
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Advanced mass spectrometry technology has pushed proteomic analyses to the forefront of biological and biomedical research. Limitations of proteomic approaches now often remain with sample preparations rather than with the sensitivity of protein detection. However, deciphering proteomes and their context-dependent dynamics in subgroups of tissue-embedded cells still poses a challenge, which we meet with a detailed version of our recently established protocol for cell-selective and temporally controllable metabolic labeling of proteins in Drosophila. This method is based on targeted ...
[摘要] 先进的质谱技术将蛋白质组学分析推向了生物与生物医学研究的前沿。 蛋白质组学方法的局限性现在通常与样品制备相关，而不是蛋白质检测的灵敏度。 然而，破译组织嵌入细胞亚群中的蛋白质组学及其上下文相关动力学仍然是一个挑战，我们通过我们最近建立的细胞选择性和时间上可控的代谢标记的详细版本满足了果蝇中蛋白质的代谢标记。 该方法基于甲硫氨酰-tRNA合成酶的突变变体MetRSL262G 的靶向表达，其允许用非标准氨基酸叠氮基亮氨酸（ANL）装载甲硫氨酸tRNA，因此，用于 可检测的ANL并入新生多肽链。
【背景】任何给定细胞的蛋白质组成与其分化和功能状态密切相关。细胞蛋白质组的变化可能反映其对细胞内在线索的反应或源自相应生物体或其环境中其他地方的信号。反过来，它们表明这些信号提示的意义。因此，以细胞类型特异性方式对蛋白质组及其动力学进行解密已成为当前研究的重点，更好地了解生理或病理生理过程的分子事件。然而，在这个方向上的任何蛋白质组学方法都受到在感兴趣的组织或器官内相互连接的细胞类型的异质性的挑战。在大脑中，例如，不同类型的神经元和胶质细胞形成控制动物或人类行为所需的网络。此外，已经确定，这些网络中导致长期记忆的信息处理严格依赖于新生蛋白质的合成和降解。虽然已经为许多神经元蛋白（例如，即时早期基因蛋白）例示了这一点，但显而易见的是，仅在有限数量的细胞中（或甚至是）的上调或下调的蛋白质在不同的细胞群中相反地调节）可以容易地逃避常规的检测模式，其中细胞蛋白质组在整个脑区域被平均化。 ...
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| Vacuole Structure Analysis during Cell Death Subsequent to Application of Erwinia carotovora Culture Filtrates to Cell Cultures of Nicotiana tabacum
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Author:
Date:
2015-10-20
[Abstract] We recently established an experimental model system for efficient defense-related cell death using tobacco BY-2 cultured cells treated with culture filtrates of the pathogenic bacterium Erwinia carotovora (E. carotovora) (Hirakawa et al., 2015). Applying this experimental system to transgenic BY-2 cells stably expressing the vacuolar membrane marker GFP-VAM3 (Kutsuna and Hasezawa, 2002) allowed us to monitor changes in vacuolar membrane structures including a decrease of transvacuolar strands during cell death (Hirakawa et al., 2015). Our model system can ...
[摘要] 我们最近建立了使用烟草BY-2培养细胞的有效防御相关细胞死亡的实验模型系统，所述培养细胞用致病性细菌欧文氏菌（Erwinia carotovora）（ E。carotovora （Hirakawa ，，2015）。将该实验系统应用于稳定表达液泡膜标记物GFP-VAM3的转基因BY-2细胞（Kutsuna和Hasezawa，2002），使我们能够监测液泡膜结构的变化，包括细胞死亡期间跨血管链的减少（Hirakawa et al。 al。，2015）。我们的模型系统可以帮助调查细胞器动力学在国防相关的细胞死亡。在这里，我们显示应用 E的协议。 carotovora过滤到BY-2细胞和共聚焦观察液泡膜动力学和随后的细胞死亡。我们使用细胞周期同步的BY-2细胞来有效地监测内陷的液泡膜，例如在我们最近的报告中的跨血管链（Hirakawa等人，2015）;然而，我们不描述本文中的细胞周期同步的协议。对于BY-2细胞同步的逐步方案，请参考先前的方案论文（Nagata和Kumagai，1999; Kumagai-Sano等人，2006）。
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