Obtaining Multi-electrode Array Recordings from Human Induced Pluripotent Stem Cell–Derived Neurons
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Neuronal electrical properties are often aberrant in neurological disorders. Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)-derived neurons represent a useful platform for neurological disease modeling, drug discovery and toxicity screening in vitro. Multi-electrode array (MEA) systems offer a non-invasive and label-free platform to record neuronal evoked-responses concurrently from multiple electrodes. To better detect the neural network changes, we used the Axion Maestro MEA platform to assess neuronal activity and bursting behaviors in hiPSC-derived neuronal cultures. Here we ...
[摘要] 神经元电特性在神经疾病中经常是异常的。 人诱导的多能干细胞(hiPSC)衍生的神经元代表神经疾病建模,药物发现和体外毒性筛选的有用平台。 多电极阵列(MEA)系统提供了一个非侵入性的无标记平台,可同时记录来自多个电极的神经元诱发反应。 为了更好地检测神经网络变化,我们使用了Axion Maestro MEA平台来评估hiPSC衍生的神经元培养物中的神经元活动和爆裂行为。 在这里,我们描述了神经元培养准备,MEA记录和数据分析的详细方案,我们希望这将有益于该领域的其他研究人员。 【背景】人类诱导多能干细胞(hiPSC)技术目前正用于体外模拟神经和精神疾病。最近的研究已经证明,与特定疾病有关的某些细胞表型可以在盘中重现。神经电活动是神经系统功能的本质,代表了正常功能对于情绪,记忆,感觉形态和体内行为至关重要的交流的关键形式。在疾病状况下,电特性可能受到影响,因此了解基于hiPSC的神经疾病模型中的神经元电路连接性,生理学和病理学非常重要。
膜片钳和多电极阵列(MEA)技术是用于评估电生理学活性并由此评估神经元功能的主要技术。尽管膜片钳是研究单个细胞的活性和功能的强大的细胞内方法(Neher等人,1978),MEA平板具有记录细胞外动作电位(或尖峰)的能力,和同一板中数千个不同细胞同时的局部场电位,从而更好地理解网络水平的神经元活动(Hutzler等人,2006; ...
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In vitro Homeostatic Proliferation of Human CD8 T Cells
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Long-lived T-cell–mediated immunity requires persistence of memory T cells in an antigen-free environment while also maintaining a heightened capacity to recall effector functions. Such antigen-independent homeostatic proliferation is mediated in part by the common gamma-chain cytokines IL-7 and IL-15. To further explore the mechanisms governing maintenance of effector functions in long-lived memory T cells during antigen-independent proliferation, human naïve and memory CD8 T cells can be sorted from peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), labeled with the proliferation-tracking dye ...
[摘要] 长寿T细胞介导的免疫需要在无抗原环境中持续存在记忆T细胞,同时还保持提高的回忆效应器功能的能力。这种不依赖于抗原的体内平衡增殖部分由常见的γ链细胞因子IL-7和IL-15介导。为了进一步探索在抗原非依赖性增殖过程中维持长效记忆T细胞中效应子功能的机制,可以从外周血单核细胞(PBMCs)中分选人幼稚和记忆CD8T细胞,用增殖跟踪染料羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE),然后根据它们的细胞分裂水平进行纯化。这使得研究人员能够评估经历细胞因子驱动的增殖的细胞中期望的分子靶点的差异。我们在这里提供了一个协议,用于评估在分裂和未分裂的人类幼稚和记忆CD8 T细胞中的表观遗传程序,在用IL-7和IL-15培养7天之后,以说明这种方法如何阐明控制在长寿记忆CD8T细胞的稳态期间保持效应子功能。 【背景】获得性免疫的一个主要特征是对先前遇到的病原体的免疫记忆的发展(Plotkin等人,2013)。记忆CD8 T细胞在为宿主以前遇到的病原体提供终生保护方面发挥重要作用,但为了提供长寿命的保护,T细胞必须已经获得了在无抗原中持续并保持效应功能的能力环境。在此期间,记忆T细胞响应于IL-7/15细胞因子进行抗原非依赖性增殖,尽管程度不同。
记忆CD8 T细胞的总池是几种不同的细胞亚群的异质组合,其对稳态细胞因子的反应不同。例如,CD8 ...
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A Flow-assay for Farnesol Removal from Adherent Candida albicans Cultures
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Author:
Date:
2017-10-05
[Abstract] Here, we describe a protocol for a continuous flow system for C. albicans cultures growing adherent to a plastic surface. The protocol was adapted from a previous method established to simulate blood flow on endothelial cells (Wilson and Hube, 2010). The adapted protocol was used by us for the removal of molecules in C. albicans supernatants, especially farnesol, which accumulate over the time course of incubation and cannot be specifically depleted. The system used, however, allows various applications including the simulation of physiological flow conditions. Several ...
[摘要] 在这里,我们描述了用于连续流系统的协议。 白色念珠菌生长粘附在塑料表面上的培养物。 该方案根据建立以模拟内皮细胞上的血液流动的先前方法改编(Wilson和Hube,2010)。 我们使用适应方案去除C中的分子。 白色念珠菌上清液,特别是法呢醇,其在孵育的时间过程中积累并且不能被特异性地耗尽。 然而,所使用的系统允许各种应用,包括模拟生理流动条件。 制造商网站上给出了几个示例应用程序(https://ibidi.com/perfusion-system/112-ibidi-pump-system.html). 【背景】法尼醇是人类致病真菌白色念珠菌中的酵母 - 菌丝转移(Hornby等人,2001)的有效抑制剂,并且还促进了酵母生长的逆转预制长丝(Lindsay等人,2012)。群体感知分子(QSM)快速积聚在白念珠菌EED1缺失株的上清液中,并促进突变体(Polke等人)的反向形态发生和菌丝维持缺陷>,2017)。由于我们无法阻止法呢醇的合成(Polke等人,2017),我们使用了ibidi ®泵系统,通过单向去除上清液中累积的QSMs流。流动应用以及在孵育期间的恒定的培养基更换在C中显着延长了丝状化。白色念珠菌eed1Δ突变体。这表明QSM积累的成功去除,并且提供了在C中的菌丝维持和法呢醇信号之间的直接联系。白色假丝酵母。用于此协议(ibidi ...
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