| In vivo OVA-specific Cytotoxic CD8+ T Cell Killing Assay
|
|
Author:
Date:
2016-06-20
[Abstract] Cytotoxic CD8+ T cells are responsible for the lysis of cells expressing peptides associated with MHC class I molecules and derived from infection with a pathogen or from mutated antigens. In order to quantify in vivo this antigen-specific CD8+ T cell killing activity, we use the in vivo killing assay (IVK). Here we describe the protocol for the lysis of cells expressing a CD8+ T cell epitope of the OVA protein (SIINFEKL). Mice are previously immunized with the OVA protein and 7 days after immunization, they receive a mix of target cells, ...
[摘要] 细胞毒性CD8 + T细胞负责裂解表达与MHC I类分子相关并且源自病原体感染或突变抗原的肽的细胞。为了在体内定量该抗原特异性CD8 + T细胞杀伤活性，我们使用体内杀伤试验（IVK）。在这里，我们描述了用于裂解表达OVA蛋白（SIINFEKL）的CD8 + T细胞表位的细胞的方案。小鼠先前用OVA蛋白免疫，并且在免疫后7天，它们接受从用SIINFEKL肽脉冲并用高水平的CFSE标记的天然C57BL/6脾细胞制备的靶细胞和标记的非脉冲对照细胞的混合物具有低水平的CFSE。一天后，分离受体小鼠的脾细胞并通过FACS分析以测量CFSE高度细胞和CFSE低度细胞的量。通过在免疫的和未免疫的小鼠中CFSE高与低之间的差计算裂解的百分比。
测量抗原特异性CD8 + T细胞在体内裂解其抗原的能力对评价诱导针对病原体或肿瘤抗原的适应性细胞毒性应答是非常重要的。
|
|
|
| Isolation of Splenic Dendritic Cells Using Fluorescence-activated Cell Sorting
|
|
Author:
Date:
2015-03-05
[Abstract] The spleen is a vastly vasculated organ and consists of a complex organized network of innate and adaptive immune cells. This permits the specialized functions of the spleen such as antibacterial and antifungal immunity and iron metabolism among others (Mebius and Kraal, 2005). Different dendritic cell (DC) subsets reside in the spleen and can be defined by the expression of unique surface markers. These DC subsets are recognized to perform non-redundant functions in the immune system (Merad et al., 2013). In our recent study, we found that Inositol Requiring Enzyme (IRE)-1 is ...
[摘要] 脾脏是一个巨大的血管的器官，由一个复杂的有组织的网络的先天和适应性免疫细胞组成。 这允许脾的特殊功能，例如抗菌和抗真菌免疫和铁代谢等（Mebius和Kraal，2005）。 不同的树突状细胞（DC）子集驻留在脾脏中，并且可以通过表达独特的表面标志物来定义。 认识到这些DC亚类在免疫系统中执行非冗余功能（Merad等人，2013）。 在我们最近的研究中，我们发现肌醇需求酶（IRE）-1在脾CD8a + DC中特异性激活。 此外，X-box结合蛋白（XBP）-1（由IRE-1调节的转录因子）的缺失导致脾CD8a + DC（Osorio em> et al。，2014）。 该协议允许分离用于实验使用的特异性DC亚群ex-vivo 。
|
|
|