|
Author:
Date:
2013-12-05
[Abstract] Calcium is one of the most important intracellular messengers in biological systems. Ca2+ microfluorimetry is a valuable tool to assess information about mechanisms involved in the regulation of intracellular Ca2+ levels in research on cells and in living tissues. In essence, the use of a dye that fluoresces in the presence of a target substance allows the detection of changes in the concentration of this molecule by determining the changes in the fluorescence of the probe (increases or decreases, depending on the nature of the dye used; for a review see Tsien et al. ...
[摘要] 钙是生物系统中最重要的细胞内信使之一。 Ca2 +微量荧光测定法是在细胞和活组织研究中评估涉及细胞内Ca 2+ 2+调节的机制的信息的有价值的工具。本质上，使用在目标物质存在下发荧光的染料允许通过测定探针荧光的变化来检测该分子浓度的变化（增加或减少，取决于染料的性质使用;综述参见Tsien等人.1985）。在这方面，已经开发了两种不同的方法来评估细胞内Ca 2+的测量。一方面，比率法基于使用与探针的物理化学性质相关的两个荧光强度之间的比率。这允许校正由于漂白，焦点变化，激光强度变化等造成的伪影。但是使得测量和数据处理更复杂，因为它们需要更昂贵的设备，具有改变波长发射/检测快速。一些比例的Ca 2+ 2+指示剂是Fura-2和Indo-1。另一方面，在结合Ca 2 + 时，用于非比率测量的指示剂显示其荧光强度的变化（游离指示剂通常具有非常弱的荧光）。因此，虽然荧光信号的增加可以直接与Ca 2+浓度的增加相关，但荧光强度取决于许多因素，例如获取条件，探针浓度，光程长度，蛋白质结合Ca 2+的亲和常数，等等。然而，Ca 2+ 2+的通量具有这样的量级，使得这些干扰对测量中的偏差是较小的贡献。有许多非比例的钙指示剂，其中一些是Fluo-3，Fluo-4和Calcium-Green-3。因此，对于每个实验，最合适的Ca 2+ - 探针将取决于必须评估的Ca ...
|