| Isolation and Cultivation of Primary Brain Endothelial Cells from Adult Mice
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Brain endothelial cells are the major building block of the blood-brain barrier. To study the role of brain endothelial cells in vitro, the isolation of primary cells is of critical value. Here, we describe a protocol in which vessel fragments are isolated from adult mice. After density centrifugation and mild digestion of the fragments, outgrowing endothelial cells are selected by puromycin treatment and grown to confluence within one week.
[摘要] 脑内皮细胞是血脑屏障的主要组成部分。 为了研究脑内皮细胞在体外的作用，原代细胞的分离是临床价值。 在这里，我们描述了一种方案，其中血管片段与成年小鼠分离。 在密度离心和片段的温和消化后，通过嘌呤霉素处理选择出生长的内皮细胞，并在一周内生长至汇合。
【背景】血脑屏障保护大脑免受细胞和物质的不受控制的侵入。 这主要是由脑内皮细胞形成的屏障组成的紧密和粘附连接限制细胞旁运输。
该方案被开发以克服维持其关键特征的小鼠脑内皮细胞系的有限可用性，例如表达足够量的紧密连接蛋白如闭合蛋白，ZO-1或紧密连接蛋白-5以诱导高跨内皮细胞抗性。
此外，从内含基因修饰的小鼠中分离脑内皮细胞可以在体外研究基因特异性功能。
使用这种方法，我们以前补充了体内研究，证明NF-κB信号在脑内皮细胞中维持正常血脑屏障功能的重要性（Ridder等，2015）。
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| TGFβ Release Co-culture Assay
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Author:
Date:
2014-12-05
[Abstract] TGFβ is a potent cytokine modulating various processes including proliferation, differentiation, ECM synthesis and apoptosis (Siegel and Massague, 2003). Thus in many tissues availability of TGFβ is tightly regulated. TGFβ is secreted as an inactive complex where it is encapsulated by the latency associated protein (LAP), a ligand trap protein, which inhibits TGFβ binding to its receptor and retains TGFβ in the extracellular matrix (ten Dijke and Arthur, 2007). TGFβ can be released from the matrix and converted into its biological active form by huge number of processes including heat, high ...
[摘要] TGFβ是调节各种过程包括增殖，分化，ECM合成和凋亡的有效细胞因子（Siegel和Massague，2003）。因此，在许多组织中，TGFβ的可用性受到严格调控。 TGFβ作为无活性复合物分泌，其中其被潜伏相关蛋白（LAP）封闭，LAP是一种配体捕获蛋白，其抑制TGFβ与其受体结合并在细胞外基质中保留TGFβ（十Dijke和Arthur，2007）。 TGFβ可以从基质中释放并通过大量的过程包括热，高和低pH，活性氧（ROS）或各种蛋白酶（例如，纤溶酶，弹性蛋白酶）的释放而转化为其生物活性形式，基质金属蛋白酶-2和-9）（Barcellos-Hoff和Dix，1996; Lyons等人，1988; Taipale等人，1994; Yu和Stamenkovic， 2000）。然而，在生理条件下，αv-类整联蛋白与LAP蛋白中的RGD三肽基序的相互作用代表了体内TGFβ释放的关键因素。具有整联蛋白结合缺陷型LAP蛋白（RGD基序突变为RGE）的小鼠重现了TGFβ1缺失的所有主要表型，进一步强调了整合素介导的TGFβ释放对体内发育和体内平衡的相关性小鼠，包括多器官炎症和血管发生中的缺陷（Shull等人，1992; Yang等人，2007）。这种引人注目的表型与TGFβ缺陷小鼠重叠，缺少αv-类整联蛋白的小鼠的表型（Aluwihare等人，2009; ...
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| Assay for Adherence of Vibrio cholerae to Eukaryotic Cell Lines
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Author:
Date:
2014-04-20
[Abstract] Vibrio cholerae (V. cholerae) colonizes the intestinal epithelium and secretes cholera toxin (CT), a potent enterotoxin that causes severe fluid loss characteristic of the disease cholera. V. cholerae is a non-invasive Gram-negative bacterium that adheres to intestinal cells as well as a variety of different cell types. A protocol for adherence of V. cholerae to various cell lines is described. The adhered bacteria can be used to examine expression of genes that are differentially expressed between adhered and unadhered bacteria or other purposes (Dey et ...
[摘要] 霍乱弧菌（霍乱弧菌）殖民肠上皮并分泌霍乱毒素（CT），霍乱毒素（CT）是一种有效的肠毒素，其导致霍乱的特征性严重的流体损失。 V。 霍乱菌是一种非侵入性革兰氏阴性细菌，其粘附于肠细胞以及各种不同的细胞类型。 遵守 V的协议。 霍乱等对各种细胞系的影响。 粘附的细菌可用于检查在粘附和未粘附的细菌或其他目的之间差异表达的基因的表达（Dey等人，2013）。
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