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Author:
Date:
2014-06-05
[Abstract] In order to prepare protein extracts of Plasmodium falciparum blood stages for western blot analysis, infected red blood cells (iRBC) need to be separated from uninfected red blood cells (uRBC) which make up the bulk of the parasite culture. Depending on the localisation of the parasite protein of interest, different methods are available to achieve this. If the protein is present within the parasite or is attached to a cellular structure of the iRBC cell, saponin can be used. This reagent lyses the membranes of infected and uninfected erythrocytes, the Maurer´s clefts (vesicular ...
[摘要] 为了制备用于蛋白质印迹分析的恶性疟原虫血液阶段的蛋白质提取物，需要将感染的红细胞（iRBC）与构成寄生虫的主体的未感染的红细胞（uRBC）分离文化。根据感兴趣的寄生虫蛋白的定位，可以使用不同的方法来实现这一点。如果蛋白质存在于寄生虫内或附着于iRBC细胞的细胞结构，则可以使用皂苷。该试剂裂解感染的和未感染的红细胞的膜，Maurer's裂口（iRBC中的囊泡结构）和含有寄生虫的寄生虫液泡膜，但是使寄生虫质膜完整，提供了一种方便的方法来分离没有uRBC的完整寄生虫。然而，该方法的缺点是iRBC的宿主细胞胞质和寄生泡（PV）含量丢失。如果这必须避免，可以使用Percoll梯度将完整的iRBC与uRBC分离。然后可以使用Tetanolysin和皂苷的顺序处理来从寄生虫选择性释放iRBC细胞溶质和PV含量。这些选择性裂解方法也适合于确定目标蛋白质的亚细胞定位
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