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Author:
Date:
2020-08-05
[Abstract] Cell signalling, cell secretion, and plasma membrane repair are processes that critically rely on intracellular vesicles, important components of the endocytic and secretory pathways. More specifically, the strategic distribution of intracellular vesicles is important for diverse cellular processes. The method presented here is a simple, affordable, and efficient tool to analyze the distribution of intracellular vesicles such as lysosomes, endosomes, Golgi vesicles or secretory granules under different experimental conditions. The method is an accessible way to analyze the density and ...
[摘要] [摘要]细胞信号传导、细胞分泌和质膜修复是严重依赖于细胞内小泡的过程，这些小泡是细胞内吞和分泌途径的重要组成部分。更具体地说，细胞内囊泡的策略性分布对不同的细胞过程非常重要。该方法是一种简单、经济、有效的分析溶酶体、内体、高尔基体或分泌颗粒等细胞内囊泡分布的工具。该方法是通过结合免疫荧光和基于像素的量化软件（例如ImageJ/FIJI）来分析细胞内囊泡的密度和分散度的一种简便方法。该协议可以在科学界广泛使用，因为它利用了ImageJ/FIJI，一个免费的开源软件。通过追踪荧光囊泡相对于细胞核的位置，我们能够量化和分析它们在整个细胞中的分布。
[背景]细胞内小泡是细胞内吞和分泌途径的重要组成部分，负责维持细胞的一些重要功能。因此，许多研究集中在生理和病理条件下调控囊泡分布的途径，而其他研究则探讨了在许多重要的细胞过程中囊泡分布异常的后果。
1988年，Aunis和Bader发现分泌细胞中存在两个分泌小泡池（Aunis和Bader，1988）。第一个小池位于质膜下方，分泌不受细胞骨架的调节，而是由于与细胞骨架中的元素结合而附着在质膜上；第二个池子附着在肌动蛋白细丝上，略远离细胞膜，当第一池耗尽后，可被动员到质膜的内小叶上。这是通过膜的去极化、肌动蛋白丝的重排和细胞骨架屏障的溶解来实现的，从而使其从细胞骨架上脱离，到达胞外部位。
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Author:
Date:
2014-07-05
[Abstract] Phagolysosomal trafficking is an important innate defense pathway that clears microbes by delivering them to lysosomes, the degradative compartment of the cell. Mycobacterium tuberculosis (Mtb), the causative agent of tuberculosis, subverts this host defense mechanism by arresting maturation of the phagosome. The ability of Mtb to arrest its delivery to the lysosome can be demonstrated by the prolonged co-localization of bacteria containing phagosomes/vacuole with early phagosomal markers [such as, Ras- related proteins in the brain 5 (Rab5) and Transferrin receptor (TfR)], and a ...
[摘要] 吞噬溶酶体运输是重要的先天防御途径，通过将其递送至溶酶体，即细胞的降解区室来清除微生物。结核病的致病因子结核分枝杆菌（Mtb）通过阻滞吞噬体的成熟来破坏这种宿主防御机制。 Mtb阻止其递送至溶酶体的能力可以通过含有吞噬体/液泡的细菌与早期吞噬体标记物[例如，脑5中的Ras相关蛋白（Rab5）和转铁蛋白受体（TfR） ）]，以及未获得晚期吞噬体和溶酶体标记物（例如Rab7和LAMP1）（Deretic和Fratti，1999，Mehra等人，2013）。在这里，概述了用分枝杆菌物种感染巨噬细胞的方案，所述分枝杆菌物种如致病性Mtb疫苗菌株牛分枝杆菌 - 卡介苗（BCG）和快速分裂的非致病性耻垢分枝杆菌（Msmeg），然后间接免疫荧光显微镜观察宿主液泡标记。此后，通过使用数学工具处理细菌的二值图像来进行分枝杆菌和宿主液泡标记如TfR和LAMP1之间的共定位程度的自动定量。这导致直接在细菌/细菌簇周围的这些宿主标志物的平均荧光强度（MFI）的定量，相对于手动完成时具有增加的灵敏度。通过操纵宿主或病原体，该测定可用于评价细胞内运输的宿主或细菌决定簇。基本方法可以应用于研究其他细菌或颗粒状珠子的运输，尽管感染和吞噬体成熟的动力学将取决于吞噬性货物。数学分析工具可用于许多标准成像分析程序。然而，对于类似分析的任何适应性应由个体用户利用其成像和分析平台来确认。
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