| An Image-based Assay for High-throughput Analysis of Cell Proliferation and Cell Death of Adherent Cells
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Author:
Date:
2018-05-05
[Abstract] In this protocol, we describe a method to monitor cell proliferation and death by live-cell imaging of propidium iodide (PI)-stained adherent mammalian cells. PI is widely used to assess cell death. However, it is usually used in end-point assays. Recently, we implemented the use of PI for real-time cell death assessment by automated imaging. Cells are seeded in a 96-well format, and after attachment, the treatments are added directly to the wells together with PI. Thereafter, cells are subjected to automated time-lapse imaging and quantification by computer software. Combined analyses of ...
[摘要] 在该协议中，我们描述了通过碘化丙啶（PI）染色的贴壁哺乳动物细胞的活细胞成像来监测细胞增殖和死亡的方法。 PI广泛用于评估细胞死亡。 但是，它通常用于终点检测。 最近，我们通过自动成像实现了PI的实时细胞死亡评估。 将细胞以96孔形式接种，并且在附着后，将处理与PI一起直接加入到孔中。 之后，通过计算机软件对细胞进行自动延时成像和定量。 相衬和荧光图像的组合分析允许评估对细胞增殖的处理效果以及细胞死亡的程度和动力学。
【背景】多种基于细胞的测定可用于确定细胞死亡，但其中大多数测定包括MTT（溴化3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑鎓）测定，晶蓝染色，和各种基于流式细胞术的方法，都有作为终点分析的限制。最近，我们使用自动荧光成像系统（Essen Bioscience的IncuCyte ZOOM）（Sehgal等人，2017）将碘化丙啶（PI）用于细胞死亡的活细胞评估。通过对相差图像进行组合分析，可以同时检测细胞抑制和细胞毒性效应。这种方法证明是可靠和可重复的，以及非常简单和便宜。在我们最近的出版物中，我们将它用于三种不同的癌细胞系（LNCaP，PC3和MCF7），以有效地确定和比较ER Ca 2 +泵抑制剂毒胡萝卜素各种药物类似物（Tg ）（Sehgal et ...
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| Analysis of Cancer Stromal Reaction Using an O-ring Co-culture Assay
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Author:
Date:
2017-02-20
[Abstract] We have developed a 2D heterotypic co-culture technique between fibroblasts and cancer cells that enables the study of the stromal reaction. For such, stromal cells are seeded and cultured immediately around a tumour cell line, and the cells establish cell-cell contacts, as well as a gradient of soluble factors throughout the stromal cells, similar to that found in tissues. Thus, this system also enables the researcher to distinguish between events that are caused by direct cell-cell contact and secreted factors.
[摘要] 我们在成纤维细胞和癌细胞之间开发了二维异型共培养技术，可以研究基质反应。为此，将基质细胞接种并立即在肿瘤细胞系周围培养，并且细胞建立细胞 - 细胞接触以及遍及基质细胞的可溶性因子的梯度，类似于在组织中发现的。因此，该系统还使得研究者能够区分由直接的细胞 - 细胞接触和分泌因子引起的事件。
背景 组织内肿瘤的生长和存活取决于与周围基质细胞（如成纤维细胞，炎性细胞，内皮细胞和淋巴细胞）的相互作用。研究表明，随着肿瘤生长，癌细胞与周围成纤维细胞之间存在广泛的串扰。此外，肿瘤细胞可以将这些成纤维细胞激活成肿瘤相关成纤维细胞（TAF）。在某些情况下，这些成纤维细胞可能会限制肿瘤生长（Coulson-Thomas等人，2011和2013）;然而，在许多情况下，这些TAF帮助肿瘤细胞生长和存活（Coulson-Thomas等，2010和2015）。因此，体外癌症研究也应考虑到TAF对癌细胞的保护作用。考虑到这一点，我们在成纤维细胞和癌细胞之间开发了2D异型共培养技术，可以在同一系统中研究TAF和癌细胞。
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| Mitochondrial Biogenesis Assay after 5-day Treatment in PC-3 Cells
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Author:
Date:
2015-01-20
[Abstract] Drug-induced mitochondrial injury can be caused by many different mechanisms including inhibition of mitochondrial DNA replication, transcription, translation, and altered protein function. Determination of the level of mitochondrial protein synthesis, or mitochondrial biogenesis, relative to the cellular protein synthesis, provides important information on potential mitochondrial toxicity.
[摘要] 药物诱导的线粒体损伤可以由许多不同的机制引起，包括线粒体DNA复制，转录，翻译和改变的蛋白质功能的抑制。 相对于细胞蛋白质合成的线粒体蛋白质合成水平或线粒体生物发生的确定提供了关于潜在线粒体毒性的重要信息。
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