| Telomere Dysfunction Induced Foci (TIF) Analysis
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Author:
Date:
2015-11-20
[Abstract] Telomerase maintains telomeric DNA in eukaryotes during early developments, ~90% of cancer cells and some proliferative stem like cells. Telomeric repeats at the end of chromosomes are associated with the shelterin complex. This complex consists of TRF1, TRF2, Rap1, TIN2, TPP1, POT1 which protect DNA from being recognized as DNA double-stranded breaks. Critically short telomeres or impaired shelterin proteins can cause telomere dysfunction, which eventually induces DNA damage responses at the telomeres. DNA damage responses can be identified by antibodies to 53BP1, gammaH2AX, Rad17, ATM, and ...
[摘要] 端粒酶在早期发育期间在真核生物中维持端粒DNA，〜90％的癌细胞和一些增殖性干细胞。染色体末端的端粒重复与shelterin复合物相关。该复合物由TRF1，TRF2，Rap1，TIN2，TPP1，POT1组成，其保护DNA不被识别为DNA双链断裂。临界短的端粒或受损的遮蔽蛋白可引起端粒功能障碍，其最终在端粒诱导DNA损伤反应。 DNA损伤反应可以通过抗53BP1，gammaH2AX，Rad17，ATM和Mre11的抗体来鉴定。未封端的端粒的DNA损伤灶被称为端粒功能障碍诱导的Foci（TIF）（de Lange，2005; Takai等人，2003）。
TIF测定基于使用针对遮蔽蛋白如TRF2之一的抗体对抗DNA损伤标记物例如γ-H2AX和端粒的抗体的DNA损伤的共定位检测（Takai等人，2003; de Lange，2002; Karlseder等人，1999）。我们在这里描述的方法可以用于正常的人类和癌细胞。
其他常用的方法 - Telomere限制性片段（TRF）分析（Mender和Shay，2015b）和端粒重复扩增方案（TRAP） ...
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| Telomere Restriction Fragment (TRF) Analysis
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Author:
Date:
2015-11-20
[Abstract] While telomerase is expressed in ~90% of primary human tumors, most somatic tissue cells except transiently proliferating stem-like cells do not have detectable telomerase activity (Shay and Wright, 1996; Shay and Wright, 2001). Telomeres progressively shorten with each cell division in normal cells, including proliferating stem-like cells, due to the end replication (lagging strand synthesis) problem and other causes such as oxidative damage, therefore all somatic cells have limited cell proliferation capacity (Hayflick limit) (Hayflick and Moorhead, 1961; Olovnikov, 1973). The progressive ...
[摘要] 虽然端粒酶在约90％的原发性人类肿瘤中表达，但除了瞬时增殖的干细胞样细胞之外，大多数体细胞组织细胞不具有可检测的端粒酶活性（Shay和Wright，1996; Shay和Wright，2001）。由于末端复制（滞后链合成）问题和其它原因例如氧化损伤，端粒在正常细胞中的每个细胞分裂（包括增殖的干细胞样细胞）逐渐缩短，因此所有体细胞具有有限的细胞增殖能力（Hayflick极限） （Hayflick和Moorhead，1961; Olovnikov，1973）。渐进性端粒缩短最终导致正常细胞中的生长停滞，其被称为复制衰老（Shay等人，1991）。一旦端粒酶在癌细胞中被激活，通过在染色体末端添加TTAGGG重复来稳定端粒长度，从而使细胞分裂无限延续（Shay和Wright，1996; Shay和Wright，2001）。因此，衰老和癌症之间的联系可以部分地解释端粒生物学。有许多快速和方便的方法来研究端粒生物学，例如端粒限制性片段（TRF），端粒重复扩增方案（Telomere Repeat Amplification Protocol， TRAP）（Mender and Shay，2015b）和端粒功能障碍诱导Foci（TIF）分析 ...
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