| Molecular Size Analysis of Recombinant Importin-histone Complexes Using Analytical Ultracentrifugation
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Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] Histones constitute the protein components of nucleosomes. Despite their small sizes, histones do not diffuse through the nuclear pore complex. Instead, they are transported to the nucleus by importins, either alone or in complex with histone chaperones. Determining the molecular size of the importin-histone complexes is key to understanding the mechanism of histone transport and also the potential roles of importins as histone chaperones and in the assembly of nucleosomes. Here we report a simple and reproducible sedimentation-velocity based method to determine the molecular sizes of ...
[摘要] [摘要] 组蛋白构成核小体的蛋白质成分。尽管其尺寸很小，但组蛋白不会通过核孔复合物扩散。取而代之的是，它们单独或与组蛋白分子伴侣复合地被重要蛋白转运至细胞核。确定importin-histone复合物的分子大小是理解组蛋白转运机制的关键，也是importins作为组蛋白伴侣和在核小体组装中的潜在作用的关键。在这里，我们报告了一种简单且可重现的沉降速度为基础的方法，该方法使用分析超速离心法来确定importin-histone配合物的分子大小。该方法不使用任何报告子标签或与色谱柱树脂的相互作用，从而分析了天然蛋白质的相互作用。
[背景] 核小体是真核染色质的最基本的结构和功能单元。组蛋白H2A，H2B，H3和H 4是核小体的蛋白质成分。每个核包括147个碱基的DNA wrapp的对编绕Ñ H3-H4四聚体和H2A-H2B二聚体的两个拷贝（Luger的等人，1997年一）。像细胞中的其他蛋白质一样，组蛋白在细胞质中合成。然而，核小体组装在核中。尽管它们的小尺寸（单体是10-15 kDa）的，组蛋白不通过核孔复合物扩散，而是可以单独使用或在复合物与由组蛋白importins伴侣输送要么（约翰逊-SAL IBA 等人，2000 ; Baake 等等人，2001；Mosammaparast 等人，2001，2002a和2002b；Muhlhausser ...
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| Telomere Restriction Fragment (TRF) Analysis
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Author:
Date:
2015-11-20
[Abstract] While telomerase is expressed in ~90% of primary human tumors, most somatic tissue cells except transiently proliferating stem-like cells do not have detectable telomerase activity (Shay and Wright, 1996; Shay and Wright, 2001). Telomeres progressively shorten with each cell division in normal cells, including proliferating stem-like cells, due to the end replication (lagging strand synthesis) problem and other causes such as oxidative damage, therefore all somatic cells have limited cell proliferation capacity (Hayflick limit) (Hayflick and Moorhead, 1961; Olovnikov, 1973). The progressive ...
[摘要] 虽然端粒酶在约90％的原发性人类肿瘤中表达，但除了瞬时增殖的干细胞样细胞之外，大多数体细胞组织细胞不具有可检测的端粒酶活性（Shay和Wright，1996; Shay和Wright，2001）。由于末端复制（滞后链合成）问题和其它原因例如氧化损伤，端粒在正常细胞中的每个细胞分裂（包括增殖的干细胞样细胞）逐渐缩短，因此所有体细胞具有有限的细胞增殖能力（Hayflick极限） （Hayflick和Moorhead，1961; Olovnikov，1973）。渐进性端粒缩短最终导致正常细胞中的生长停滞，其被称为复制衰老（Shay等人，1991）。一旦端粒酶在癌细胞中被激活，通过在染色体末端添加TTAGGG重复来稳定端粒长度，从而使细胞分裂无限延续（Shay和Wright，1996; Shay和Wright，2001）。因此，衰老和癌症之间的联系可以部分地解释端粒生物学。有许多快速和方便的方法来研究端粒生物学，例如端粒限制性片段（TRF），端粒重复扩增方案（Telomere Repeat Amplification Protocol， TRAP）（Mender and Shay，2015b）和端粒功能障碍诱导Foci（TIF）分析 ...
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