| Chromatographic Analysis for Targeted Metabolomics of Antioxidant and Flavor-Related Metabolites in Tomato
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Author:
Date:
2021-03-05
[Abstract] Targeted metabolomics is a useful approach to evaluate crop breeding studies. Antioxidant and flavor-related traits are of increasing interest and are considered quality traits in tomato breeding. The present study presents chromatographic methods to study antioxidants (carotenoids, vitamin C, vitamin E, phenolic compounds, and glutathione) and flavor-related characters (sugars and organic acids) in tomato. Two different extraction methods (for polar and apolar entities) were applied to isolate the targeted compounds. The extraction methods developed in this work were time and cost-effective ...
[摘要] [摘要]靶向代谢麦克风是评估作物育种研究的有用方法。抗氧化剂和与风味有关的性状受到越来越多的关注，被认为是番茄育种中的品质性状。本研究提供了色谱方法来研究番茄中的抗氧化剂（类胡萝卜素，维生素C，维生素E，酚类化合物和谷胱甘肽）和与风味相关的特征（糖和有机酸）。应用了两种不同的提取方法（针对极性和非极性实体）来分离目标化合物。由于不需要进一步纯化，因此这项工作中开发的提取方法既省时又经济。使用RP C18色谱柱，通过RP-C18色谱柱在适当波长下对每种化合物进行类胡萝卜素，维生素C，谷胱甘肽和酚酸的分析。用RP C18和NH2色谱柱通过HPLC分析维生素E和糖，并分别通过FLD和RI检测器进行检测。此外，MSTFA衍生化后，使用Rtx 5DA色谱柱使用GC-FID分析有机酸。结果，开发了定量重要植物代谢物的灵敏分析方法，并在本文中进行了描述。这些方法不仅适用于番茄，但都还表征其他物种的香味相关的和抗氧化的化合物。因此，这些协议可用于指导作物育种的选择。
[背景]代谢组学是其受到关注的其潜在的援助作物育种研究施加生化途径。在番茄育种中，由于消费者对提高作物品质的偏好，抗氧化剂和与风味有关的代谢产物都受到了越来越多的关注。人类无法自己合成抗氧化剂分子; ...
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| Quantitative Irreversible Tethering (qIT) for Target-directed Covalent Fragment Screening
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Author:
Date:
2020-12-20
[Abstract] Small molecules that react to form covalent bonds with proteins are widely used as biological tools and therapeutic agents. Screening cysteine-reactive fragments against a protein target is an efficient way to identify chemical starting points for covalent probe development. Mass spectrometry is often used to identify the site and degree of covalent fragment binding. However, robust hit identification requires characterization of the kinetics of covalent binding that can be readily achieved using quantitative irreversible tethering. This screening platform uses a non-specific ...
[摘要] [摘要]与蛋白质反应形成共价键的小分子被广泛用作生物学工具和治疗剂。筛选针对蛋白质靶标的半胱氨酸反应性片段是鉴定共价探针开发的化学起点的有效方法。质谱通常用于鉴定共价片段结合的位点和程度。然而，强大的命中鉴定需要的共价结合的动力学表征是 使用定量不可逆的网络共享可以轻松实现。该筛选平台使用非特异性的半胱氨酸反应性荧光探针来监测共价片段与含半胱氨酸的生物分子之间的反应速率。同时针对目标蛋白和作为对照的谷胱甘肽筛选片段文库，以鉴定具有动力学选择性的命中片段，以对目标进行共价修饰。通过定量不可逆的束缚进行筛选，可以解释单个片段内在反应性的变化，从而实现可靠的命中鉴定和排名。
[背景]位点定向配体发现最早在2000报道，并利用表面暴露半胱氨酸残基共价陷阱二硫键连接的片段，其结合在相邻的口袋（Erlanson等人，2000 ）。从那时起，不可逆的半胱氨酸靶向抑制剂已广泛普及，现在已成为多种肿瘤学适应症的一线治疗方法，其中值得注意的例子是针对BTK和EGFR以及以前不可药物治疗的靶标，例如KRAS（G12C）。随着这些发展，基于共价片段的配体发现已成为设计靶标特异性共价抑制剂的有效途径（Resnick et al。，2019 ...
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| Measurement of Ascorbic Acid and Glutathione Content in Cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803
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Author:
Date:
2020-10-20
[Abstract] Ascorbic acid (AsA) and gluthathione (GSH) are two key components of the antioxidant machinery of eukaryotic and prokaryotic cells. The cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 presents both compounds in different concentrations (AsA, 20-100 μM and GSH, 2-5 mM). Therefore, it is important to have precise and sensitive methods to determine the redox status in the cell and to detect variations in this antioxidants. In this protocol, we describe an improved method to estimate the content of both antioxidants (in their reduced and oxidized forms) from the same sample obtained from ...
[摘要] [摘要] 抗坏血酸（AsA）和明胶硫（GSH）是真核细胞和原核细胞抗氧化机制的两个重要组成部分。蓝藻Synechocystis sp.pcc6803以不同浓度（AsA，20-100μM和GSH，2-5mm）呈现这两种化合物。因此，有精确和敏感的方法来确定细胞中的氧化还原状态和检测这种抗氧化剂的变化是很重要的。在该方案中，我们描述了一种改进的方法，用以从Synechocystis sp.pcc6803的液体培养中获得的同一样品中估算两种抗氧化剂（以还原形式和氧化形式）的含量。
[背景] 细胞中的氧化还原状态可以被多种因素改变，产生氧化应激。我们使用该方案来量化暴露于50℃高温下的Synechocystis sp. PCC 6803中的GSH和AsA含量。如拟南芥所述，热胁迫导致抗氧化剂含量下降，并通过铁作用引起细胞死亡(Distefano et al.， 2017;Aguilera等人，2019年预印本)。虽然本方案是针对Synechocystis sp. PCC 6803制定的，但也可用于测定其他蓝藻中GSH和AsA的含量。蓝藻中AsA含量很低，正常条件下uM含量在一定范围内，某些处理下pM含量在一定范围内。因此，我们提出了这个敏感的方法与一个改进的细胞裂解程序。
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