| In vitro RNA-dependent RNA Polymerase Assay Using Arabidopsis RDR6
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Author:
Date:
2018-01-05
[Abstract] RNA-dependent RNA polymerases (RdRPs) in eukaryotes convert single-stranded RNAs into double-stranded RNAs, thereby amplifying small interfering RNAs that play crucial roles in the regulation of development, maintenance of genome integrity and antiviral immunity. Here, we describe a method of in vitro RdRP assay using recombinant Arabidopsis RDR6 prepared by an insect expression system. By using this classical biochemical assay, we revealed that RDR6 has a strong template preference for RNAs lacking a poly(A) tail. This simple method will be applicable to other RdRPs in Arabidopsis ...
[摘要] 真核生物中的RNA依赖性RNA聚合酶（RdRP）将单链RNA转化为双链RNA，从而扩增在调节发育，维持基因组完整性和抗病毒免疫方面起关键作用的小干扰RNA。 在此，我们描述了使用通过昆虫表达系统制备的重组拟南芥RDR6的体外RdRP测定的方法。 通过使用这种经典的生物化学分析，我们发现RDR6有一个强大的模板偏好RNAs缺乏poly（A）尾巴。 这个简单的方法将适用于拟南芥属和其他生物体中的其他RdRPs。
【背景】已经在所有真核生物王国 - 植物，真菌，原生动物和动物中发现RNA依赖性RNA聚合酶（RdRP）基因（Zong等人，2009）。它们将单链RNA（ssRNA）转化为双链RNA（dsRNA），从而扩增在各种生物过程中发挥关键作用的小干扰RNA（siRNA），包括调节发育（Peragine等人， ，2004; Li等人，2005），维持基因组完整性（Volpe等人，2002; Xie等人，2004年， ）和抗病毒免疫性（Mourrain等人，2000; Yu等人，2003; Garcia-Ruiz等人，2010; Wang ，2010）。除了这种RdRP活性之外，RdRP还具有称为末端核苷酸转移酶（TNTase）活性的另一种酶活性（Curaba和Chen，2008; ...
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| In vitro Treatment of Mouse and Human Cells with Endogenous Ligands for Activation of the Aryl Hydrocarbon Receptor
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] Activation of the aryl hydrocarbon receptor (AHR) by endogenous ligands has been implicated in a variety of physiological processes such as cell cycle regulation, cell differentiation and immune responses. It is reported that tryptophan metabolites, such as kynurenine (Kyn) and 6-formylindolo(3,2-b)carbazole (FICZ), are endogenous ligands for AHR (Stockinger et al., 2014). This protocol is designed for treatment with Kyn or FICZ in mouse embryonic fibroblasts (MEFs) or primary peripheral monocytes.
[摘要] 通过内源性配体活化芳基烃受体（AHR）已涉及多种生理过程，如细胞周期调控，细胞分化和免疫应答。据报道，色氨酸代谢物，如犬尿胆碱（Kyn）和6-甲基吲哚（3,2-b）咔唑（FICZ）是AHR的内源性配体（Stockinger等人，2014）。该方案设计用于在小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）或初级周边单核细胞中用Kyn或FICZ进行治疗。
背景 色氨酸代谢物如Kyn和FICZ是生理条件下AHR的内源性配体。 Kyn由色氨酸-2,3-双加氧酶（TDO）和/或吲哚胺-2,3-双加氧酶1和2（IDO1 / 2）产生，并有助于抑制抗肿瘤反应和恶性进展（Stockinger等人，2014）。 ...
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| HBV Infection in Human Hepatocytes and Quantification of Encapsidated HBV DNA
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Author:
Date:
2016-01-20
[Abstract] Human hepatic cancer cell lines such as HepG2, Huh7, and HLE cannot get infected with Hepatitis B virus (HBV) due to lack of an HBV receptor(s). Transfection with HBV genome has so far been referred as a tool to mimic HBV infection. However, since sodium taurocholate cotransporting polypeptide (NTCP) was identified as a functional receptor for HBV (Yan et al., 2012), hepatocyte cell lines that were stably transfected with a plasmid for NTCP expression have been used for HBV infection. This protocol is designed for infection with HBV in human hepatocyte cell line HepG2 expressing NTCP ...
[摘要] 人肝癌细胞系如HepG2，Huh7和HLE由于缺乏HBV受体而不能感染乙型肝炎病毒（HBV）。 HBV基因组的转染迄今为止被称为模拟HBV感染的工具。 然而，由于牛磺胆酸钠共转运多肽（NTCP）被鉴定为HBV的功能性受体（Yan等人，2012），已经使用用用于NTCP表达的质粒稳定转染的肝细胞细胞系 为HBV感染。 该方案设计用于在表达人类肝细胞细胞系HepG2的表达NTCP（HepG2-hNTCP-C4细胞; Iwamoto等人，2014）或原代人肝细胞（PHH）的HBV感染。 在本节中，我们还描述了用于评估HBV感染的方法之一：细胞内衣壳化的HBV DNA的定量。
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