| Vascular Permeability Assay in Human Coronary and Mouse Brachiocephalic Arteries
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Author:
Liang Guo, Raquel Fernandez, Atsushi Sakamoto, Anne Cornelissen, Ka Hyun Paek, Parker J. Lee, Leah M. Weinstein, Carlos J. Collado-Rivera, Emanuel Harari, Robert Kutys, Torie S. Samuda, Nicole A. Singer, Matthew D. Kutyna, Frank D. Kolodgie, Renu Virmani and Aloke V. Finn,
Date:
2018-10-20
[Abstract] Coronary artery disease remains an important cause of morbidity and mortality. Previous work, including ours, has focused on the role of intraplaque hemorrhage, particularly from immature microvessel angiogenesis, as an important contributor to plaque progression via increases in vascular permeability leading to further intraplaque hemorrhage, which increases red cell membrane-derived free cholesterol in plaque content and inflammatory cell recruitment. Evans Blue Dye (EBD) assay is widely used as a standard assay for vasculature permeability. However, the method has not been established in ...
[摘要] 冠状动脉疾病仍然是发病率和死亡率的重要原因。以前的研究，包括我们的研究，都集中在斑块内出血的作用，特别是来自未成熟的微血管血管生成，作为斑块进展的重要因素，通过增加血管通透性导致进一步的斑块内出血，增加斑块中红细胞膜来源的游离胆固醇内容和炎症细胞募集。 Evans Blue Dye（EBD）测定法广泛用作脉管系统渗透性的标准测定法。然而，该方法尚未在新鲜人冠状动脉尸检样本中建立，以评估斑块内微血管通透性和血管生成。在该方案中，我们描述了评估人类冠状动脉样本的微血管通透性的方法，包括灌注冠状动脉的程序，用于组织学分析和免疫染色的动脉样本的收集以及使用适当的方法来分析图像。还提供了在小鼠模型中使用FITC-葡聚糖以评估血管通透性的任选程序。这些Evans Blue Dye程序可用于在各种病理条件下提供人样品和动物模型中内皮完整性和渗透性的功能测量。
【背景】
血管内皮细胞主动调节血浆成分和循环细胞（包括白细胞）从血液到亚内皮组织的浸润。这种机制通常被认为是动脉粥样硬化起始和发展的关键步骤（Mundi et al。>，2018）。血管通透性的调节通过内皮细胞 - 细胞连接的协调打开和闭合来实现。在几种疾病状态下，内源性药物如组胺，凝血酶和血管内皮生长因子（VEGF）显着但可逆地以不同方式改变细胞 - ...
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| Mouse Model of Immune Complex-mediated Vasculitis in Dorsal Skin and Assessment of the Neutrophil-mediated Tissue Damage
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] Neutrophils are the most abundant leukocytes in the blood. In the recent decades, their crucial roles in host defense, immune regulation and tissue damage have been studied in a deeper dimension. In this protocol, we described a mouse model of immune complex-mediated vasculitis in the dorsal skin induced by Arthus reaction, and the subsequent analysis of edema, hemorrhage and tissue damage due to neutrophil activation by means of Evans blue area analysis, histology, and immunofluorescence. This protocol could facilitate the investigation of cellular therapy strategy against over-activated ...
[摘要] 嗜中性粒细胞是血液中最丰富的白细胞。 近几十年来，它们在宿主防御，免疫调节和组织损伤方面的关键作用已经得到了更深入的研究。 在这个协议中，我们描述了Arthus反应诱导的背部皮肤中的免疫复合物介导的血管炎的小鼠模型，以及随后通过伊文思蓝区域分析，组织学和分析由于嗜中性粒细胞活化引起的水肿，出血和组织损伤免疫荧光。 该协议可以促进细胞治疗策略对过度活化的嗜中性粒细胞介导的组织损伤的调查。
【背景】嗜中性粒细胞构成循环白细胞的最大的进化保守部分。他们引导第一波主机防御感染或组织损伤。嗜中性粒细胞介导的细胞毒性的体外模型已被充分证实（Incani等人，1981; Dallegri等人，1984; Saffarzadeh等人，等人，2012年）。但是，为了剖析中性粒细胞介导的无菌组织损伤的复杂性，“体内”模型是必不可少的。
免疫复合物（IC）介导的血管炎是由抗原 - 抗体复合物在血管中沉积引发的疾病，其随后导致补体激活，嗜中性粒细胞募集和活化。活化的嗜中性粒细胞释放的大量活性氧和蛋白酶损害血管壁的内皮衬里并导致水肿和出血（Sindrilaru等人，2007; Goerge等人， ，2008; ...
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| Quantification of Membrane Damage/Cell Death Using Evan’s Blue Staining Technique
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] Membrane damage is a hallmark of both biotic and abiotic stress responses. The membrane determines the ability of a cell to sustain altered environmental conditions and hence can be used as a biomarker to assess stress-induced cell damage or death. We present an easy, quick, cost-effective, staining and spectrophotometric method to assess membrane stability of plant cells. In this method, Evan’s blue, an azo dye, is used to assay for cell viability. More specifically, Evan’s blue dye can penetrate through ruptured or destabilized membranes and stain cells. Thus, when plant cells are subjected ...
[摘要] 膜损伤是生物和非生物胁迫反应的标志。膜决定细胞维持改变的环境条件的能力，因此可以用作生物标志物来评估应激诱导的细胞损伤或死亡。我们提出了一种简单，快速，经济有效的染色和分光光度法来评估植物细胞的膜稳定性。在这种方法中，Evan的蓝色偶氮染料被用于测定细胞活力。更具体地说，Evan的蓝色染料可以穿透破裂或不稳定的膜并染色细胞。因此，当植物细胞受到影响膜完整性的应激时，与不受应激的对照细胞相比，Evan蓝染料渗透的细胞数将增加。相比之下，能够保持膜完整性的活的健康细胞不会吸收Evan的蓝色染料。摄取Evan蓝色染料的细胞会积累蓝色原生质染料，这些染色的细胞可以在有或没有使用相机的明视野显微镜下进行定性记录。此外，染料可以从被Evan的蓝色染料染色的细胞中提取，并且可以通过分光光度法进行定量。使用这种分析，染色阳性染色细胞中染料的积累与细胞膜损伤的程度相关，因此在各种条件下用Evan蓝色染料染色的细胞数量可用作细胞应激的指标。
【背景】植物是暴露于各种紧张因素的固着生物。膜由脂质和糖蛋白组成，作为物理保护屏障。当细胞暴露于诸如热的应力时，细胞膜的流动性被改变。氧化应激会破坏细胞膜。与氧化应激相关的活性氧（ROS）可以作用于膜脂质以降低膜的稳定性。评估膜稳定性的一个已建立的方案，称为沙利文方法，量化了膜中电解质渗漏的程度（Sullivan和Ross，1979）。这种方法是耗时的，繁琐的，涉及几个步骤。另外，由于该方法通常需要将组织暴露于高温（初始电解质泄漏和在高温沸腾后的最终电解质泄漏），所以该方法不能用于评估暴露于应力的植物中对膜的瞬时损伤。我们调整了一种可靠的Evan蓝染色技术，被许多研究人员用于评估细胞死亡或膜损伤（Smith等，1982; ...
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