| Detection of Apoptosis-like Cell Death in Ustilago maydis by Annexin V-FITC Staining
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Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Programmed cell death (PCD) guides the transition between key developmental stages in many organisms. PCD also remains an important fate for many organisms upon exposure to different stress conditions. Therefore, an insight into the progression of PCD during the execution of a biological phenomenon can yield significant details of the underlying mechanism. Apoptosis, as well as apoptosis-like programmed cell death, constitutes one of the forms of PCD in higher and lower eukaryotes respectively. Flipping of phosphatidylserine (PS) from the inner leaflet of the plasma membrane to the outer ...
[摘要] 程序性细胞死亡（PCD）指导许多生物体的关键发育阶段之间的过渡。 PCD在暴露于不同的胁迫条件下仍然是许多生物的重要命运。因此，在执行生物现象期间洞察PCD的进展可以产生潜在机制的重要细节。细胞凋亡以及凋亡样程序性细胞死亡分别构成高等和低等真核生物中PCD的一种形式。将磷脂酰丝氨酸（PS）从质膜的内部小叶翻转到外部小叶是凋亡/凋亡样PCD的不同标志之一，其标志着所述细胞死亡事件的开始。可以使用与PS特异性结合的膜联蛋白V-FITC通过染色靶细胞来检测这种翻转。在 Ustilago maydis 中，由于细胞壁的存在，膜联蛋白V-FITC对外露PS的染色是困难的。因此，这种染色的关键在于，在不显着改变下面的质膜结构/拓扑结构的情况下，温和地去除细胞壁。该协议强调了PS染色对 Ustilago maydis 中应激细胞原生质体的依赖性。
【背景】PS外化是早期可以检测到的凋亡样PCD的标志之一（Martin et al。，1995）。因此，质膜在细胞外膜上的出现标志着凋亡细胞死亡现象的发生。 Ustilago maydis 是一种生物营养植物病原体并感染寄主植物 Zea mays 。 U的生命周期。已证明maydis ...
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| A Protocol of Using White/Red Color Assay to Measure Amyloid-induced Oxidative Stress in Saccharomyces cerevisiae
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Date:
2017-08-05
[Abstract] The yeast Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) harboring ade1 or ade2 mutations manifest red colony color phenotype on rich yeast medium YPD. In these mutants, intermediate metabolites of adenine biosynthesis pathway are accumulated. Accumulated intermediates, in the presence of reduced glutathione, are transported to the vacuoles, whereupon the development of the red color phenotype occurs. Here, we describe a method to score for presence of oxidative stress upon expression of amyloid-like proteins that would convert the red phenotype of ade1/ade2 ...
[摘要] 携带 ade1 或 ade2 突变体的酵母酿酒酵母（ S。cerevisiae ）在富酵母上显示红色菌落色表型 中等YPD。 在这些突变体中，积累了腺嘌呤生物合成途径的中间代谢物。 在还原型谷胱甘肽存在下，累积的中间体被转移到空泡中，由此发生红色表型的发生。 在这里，我们描述了一种通过淀粉样样蛋白的表达来评估氧化应激存在的方法，其将将ade1 / ade2突变体酵母的红色表型转化为白色。 该测定可能是用于筛选具有抗淀粉样蛋白聚集或抗氧化应激效力的药物的有用工具。
【背景】ADE1或ADE2基因的酵母（Saccharomyces cerevisiae）突变体（例如，，ade1Δ，ade2Δ ade1-14 ade2-），当在YPD（酵母蛋白胨葡萄糖）培养基上生长时，作为腺嘌呤生物合成途径的中间代谢物的液泡（Sharma等人，2003）。包含早熟终止密码子的可抑制等位基因ade1-14 已被广泛用于评价翻译的朊病毒状态终止因子Sup35蛋白。在[ psi - ]酵母中，Sup35p保持可溶性和功能性，因此翻译在有效地终止于ade1-14的早熟终止密码子>等位基因导致截短和非功能性Ade1蛋白的合成。因此，腺嘌呤生物合成级联保持不完整，导致中间体代谢产物的积累，产生酵母的红色表型。相比之下，在[PSI + ...
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| In vitro DNA Polymerization Activity Assay Using Cell-free Extracts
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Author:
Date:
2014-08-20
[Abstract] This protocol has been designed to measure the in-vitro DNA polymerization activity in crude cell extracts of the Antarctic bacterium Pseudomonas syrinagae Lz4W. This bacterium can grow at 4 °C with optimum growth rate at 22 °C. The slow growth rate of the bacterium observed at low temperature (4 °C) compared to higher temperature (22 °C) can be attributed to the reduced rate of DNA replication at low temperature. Here we describe a protocol which we have used to quantify the in vitro DNA polymerization of cell extracts at two different temperatures.
[摘要] 该方案已经设计用于测量南极细菌假单胞菌syrinagae Lz4W的粗细胞提取物中的体外 DNA聚合活性。 该细菌可以在4℃下生长，在22℃以最佳生长速率生长。 在低温（4℃）下观察到的细菌与较高温度（22℃）相比的缓慢生长速率可以归因于在低温下DNA复制的速率降低。 在这里我们描述了一个协议，我们已经用来量化的体外细胞提取物在两个不同的温度下的DNA聚合。
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