Capturing Z-stacked Confocal Images of Living Bacteria Entering Hydathode Pores of Cauliflower
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Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract] The present protocol to visualize living bacteria at the pore level of cauliflower hydathodes is simple and trained users in confocal microscopy can execute it successfully. It can be easily adapted to capture images with other plant-microorganism interactions at the leaf surface and should be useful to obtain important information on pore and stomatal biology. A critical limitation to methods used to observe plant-microorganism interactions in the pore is the application of too much pressure to the sample during observations and z-stack acquisitions. To solve this issue, we recommend the use ...
[摘要] 目前在花椰菜水合物的孔隙水平上可视化活细菌的方案简单,共聚焦显微镜下的训练有素的用户可以成功地执行。 它可以容易地适应于在叶表面捕获其他植物 - 微生物相互作用的图像,并且应该有助于获得关于孔隙和气孔生物学的重要信息。 用于观察孔隙中植物 - 微生物相互作用的方法的关键限制是在观察和z堆叠采集期间对样品施加过大的压力。 为了解决这个问题,我们建议使用长工作距离的水浸物镜,即使使用厚样品也能进行观察。 【背景】水合物和气孔的孔隙是病原微生物入侵植物组织的可能入口点。 在花椰菜中,叶片上存在的水合物表现出大孔,类似气孔。 这些毛孔是血管病原菌黄单胞菌(Xanthomonas campestris)pv的叶感染的途径。 ((Cerutti等人,2017)。 水溶性植物存在于各种维管植物的叶上。 我们描述了一个简单的协议,通过共聚焦显微镜在孔隙水平上可视化细菌。
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Histochemical Preparations to Depict the Structure of Cauliflower Leaf Hydathodes
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Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract] Hydathodes are plant organs present on leaf margins of a wide range of vascular plants and are the sites of guttation. Both anatomy and physiology of hydathodes are poorly documented. We have recently reported on the anatomy of cauliflower and Arabidopsis thaliana hydathodes and on their infection by the vascular pathogenic bacterium Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc) (Cerutti et al., 2017). Because hydathodes are natural infection routes for several pathogens, it is necessary to have a deep knowledge of their anatomy to further better ...
[摘要] 水溶性植物是存在于各种维管植物的叶缘上的植物器官,是排列的位置。水解的解剖学和生理学都很少被证明。我们最近报道了花椰菜和拟南芥水解的解剖结构及其血管病原菌黄单胞菌(Xanthomonas campestris)pv的感染。 Cerutti等人,2017)。由于水阴是多种病原体的自然感染途径,因此需要对其解剖学有深入的了解,以进一步更好地解释受感染水合物的图像。在这里,我们描述了不同的详细方案,以获得适用于广泛植物(包括单子叶植物如大麦和水稻)的水溶性解剖学信息。用Nomarsky和共焦显微镜观察澄清的厚样品。透射光和透射电子显微镜中的光学显微镜用于观察薄和超薄切片。 【背景】在文献中,使用不同的技术来研究水溶性(Perrin,1972; Chen and Chen,2007; Wang等人,2011; Singh,2014)。 从光学显微镜(在整个组织或树脂嵌入样品的部分)到扫描或透射电子显微镜,可以使用大型方案和技术。 据我们所知,这些技术并不被组合使用,激光共焦显微镜从未用于描绘水溶性结构。 此外,我们注意到从协议到协议的变化。 我们在这里介绍了组合使用的不同技术。 它们适合花椰菜和拟南芥(Arabidopsis thaliana)。 它们已成功应用于其他植物,如单子叶植物(大麦和大米),应适用于各种植物物种。 ...
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Resin-embedded Thin-section Immunohistochemistry Coupled with Triple Cellular Counterstaining
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] This protocol was developed to study protein localisation within the vascular bundles of developing tomato fruit however, it can be applied to any resin embedded plant tissue. The vascular bundle is comprised of many different cells that all have unique properties. The mature sieve elements are enucleated and contain sieve plates that comprise of callose. This method has utilised these properties of the sieve element by combining immunohistochemistry for cell wall invertase with counterstaining of aniline blue for callose, DAPI for nucleus and cell structure is shown with the final staining ...
[摘要] 该方案被开发用于研究番茄果实的维管束内的蛋白质定位,但可应用于任何树脂嵌入植物组织。 血管束由许多不同的细胞组成,它们都具有独特的特性。 成熟的筛分元素被去核并含有包含胼lose质的筛板。 该方法通过将细胞壁转化酶的免疫组织化学与苯胺蓝复染以胼cal质结合使用筛选元件的这些性质,细胞核的DAPI和细胞结构用细胞壁的最终染色显示为calcofluor白色。 必须注意的是,按照本协议,这些部分至关重要的是使用明胶平坦固定在滑块上,因此盖板滑移不会移动样品部分。 该方案将适用于所有植物组织,并通过进行复染试验,提供细胞内蛋白质定位的其他证据。 免疫定位一直是用于研究蛋白质在组织内的定位的方法。 该方案不仅局限于感兴趣的蛋白质,还涉及周围组织中的分子结构。 据信成熟的筛子元素被去核并且在筛板内具有丰富的胼cal质沉积。 因此,为了代表这些生物学现象,应用了复染程序。 由于本研究中感兴趣的蛋白质也被认为是定位在质外体中,进一步的复染显示蛋白质和细胞壁的共标记。
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