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Coomassie Brilliant Blue R-250 Staining Solution

考马斯亮蓝R-250染色溶液

公司名称: Bio-Rad Laboratories
产品编号: 1610436
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In vitro Analysis of Ubiquitin-like Protein Modification in Archaea
Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract]  The ubiquitin-like (Ubl) protein is widely distributed in Archaea and involved in many cellular pathways. A well-established method to reconstitute archaeal Ubl protein conjugation in vitro is important to better understand the process of archaeal Ubl protein modification. This protocol describes the in vitro reconstitution of Ubl protein modification and following analysis of this modification in Haloferax volcanii, a halophilic archaeon serving as the model organism. [摘要]  泛素样(Ubl)蛋白广泛分布于古细菌中并参与许多细胞途径。 为了更好地理解古细菌Ub1蛋白质修饰的过程,重建体外古细菌Ubl蛋白质缀合物的完善方法是很重要的。 该协议描述了Ubl蛋白质修饰的体外重建以及在作为模型生物的嗜盐古细菌Haloferax volcanii 中对这种修饰进行分析。

【背景】泛素(Ub)与靶蛋白共价连接的过程被称为泛素化,其控制真核细胞中大量的细胞过程(Glickman和Ciechanover,2002; Komander和Rape,2012)。遍在蛋白化由一系列酶(包括Ub激活酶(E1),Ub结合酶(E2s)和Ub连接酶(E3s))催化。泛素化的体外重建是确定酶之间或E3与蛋白质底物之间特异性的有用测定法(Zhao等人,2012)。在古细菌中,Ubl蛋白SAMP采用Ub折叠,并且与E1样酶UbaA催化的蛋白靶标异肽连接[Maupin-Furlow,(2014)综述]。尽管E1同系物在古细菌中广泛存在,但基于一级序列比较,在大多数古细菌中未预测经典E2或E3酶。我们最近对Haloferax volcanii的研究表明甲硫氨酸亚砜还原酶A(MsrA)是Ubl蛋白质修饰(sampylation)与UbaA一起在体内温和的氧化条件下和< (体外)(fu="">

Chase Assay of Protein Stability in Haloferax volcanii
Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract]  Highly regulated and targeted protein degradation plays a fundamental role in almost all cellular processes. Determination of the protein half-life by the chase assay serves as a powerful and popular strategy to compare the protein stability and study proteolysis pathways in cells. Here, we describe a chase assay in Haloferax volcanii, a halophilic archaeon as the model organism. [摘要]  高度调节和靶向的蛋白质降解在几乎所有的细胞过程中发挥重要作用。通过追踪测定法测定蛋白质半衰期是比较蛋白质稳定性和研究细胞中蛋白水解途径的有力和普遍的策略。在这里,我们描述了作为模型生物体的嗜盐古细菌Haloferax volcanii 中的追踪测定。

背景 在真核生物中,泛素蛋白酶体系统在高选择性和靶向性蛋白水解中起主要作用(Glickman and Ciechanover,2002)。最近的证据表明,小型古细菌泛素样修饰蛋白或SAMPs也起到了蛋白酶体破坏的靶向蛋白的作用(Maupin-Furlow,2014; Anjum等人,2015; Fu et al。 。,2016)。体内蛋白质半衰期的测量提供了研究蛋白水解途径的直接途径。环己酰胺追踪和脉冲追踪测定通常用于监测真核生物中靶向蛋白质的降解(Zhou,2004)。前一种方法用于确定放线菌酮抑制平移伸长后所有细胞蛋白的半衰期;而脉冲追踪测定法测量新合成(脉冲标记)蛋白质的周转率,而不干扰正常的细胞生长。与真核系统相比,确定古细菌中一种给定蛋白质半衰期的快速简便方法尚未明确。因此,我们开发了一种方案,用于测量盐爱好的考古Haloferax volcanii的体内蛋白质稳定性。使用翻译抑制剂(茴香霉素)和转录(放线菌素D)来最小化该古细菌中新蛋白质的合成。 ...

Induction, Isolation and Counting of Akinetes in Aphanizomenon ovalisporum
Author:
Date:
2016-05-20
[Abstract]  Akinetes are spore-like resting (dormant) cells formed by strains of filamentous cyanobacteria for surviving long periods of unfavorable conditions. During deprivation for potassium, vegetative photosynthetic cells along the filaments of the cyanobacterium Aphanizomenon ovalisporum (A. ovalisporum) (strain ILC-164) differentiate into akinetes. Akinetes are larger than vegetative cell, have a thick wall, accumulate storage compounds (cyanophycine, glycogen, lipids) and excess of DNA (Sukenik et al., 2015; Sukenik et al., 2007; Maldener et al., ... [摘要]  Akinetes是由丝状蓝细菌菌株形成的孢子样休眠(休眠)细胞,用于在长期不利条件下存活。 在剥夺钾期间,沿着蓝细菌Aphanizomenon ovalisporum( ovlisporum )(菌株ILC-164)的细丝的营养光合细胞分化成动力基因。 Akinetes大于营养细胞,具有厚壁,积累储存化合物(氰基霉素,糖原,脂质)和过量的DNA(Sukenik等人,2015; Sukenik等人, em>,2007; Maldener等人,,2014)。 动力学和营养细胞之间的结构和组成的差异允许动力蛋白的分离和分离。 通过所述方案分离的Akinet可以用于蛋白质分析,代谢活性测量,荧光原位杂交(FISH)研究等。

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